[發明專利]一種冬蟲夏草菌菌絲體發酵生產方法

有效

• 申請號: 201410449700.9
• 申請日: 2014-09-04
• 公開（公告）號: CN104145719A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 賀宗毅;陳仕江;賀元川;張德利;魯增輝;李卿
• 申請（專利權）人: 重慶市中藥研究院
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 重慶輝騰律師事務所 50215
• 代理人: 武小赟

技術領域

本發明涉及一種冬蟲夏草菌的菌種培養方法，特別涉及一種冬蟲夏草菌菌絲體發酵生產方法，本發明屬于醫藥和保健食品領域。

背景技術

冬蟲夏草(Ophiocordyceps?sinensis(Berk.)G.H.Sung?et?al.)在生物分類學上屬于子囊菌門(Ascomycota)、肉座菌目(Hypocreales)、線蟲草科(Ophiocordycipitaceae)、線蟲草屬(Ophiocordyceps)。冬蟲夏草系我國特產珍稀名貴中藥材，是冬蟲夏草菌寄生于蝠蛾屬昆蟲幼蟲體內形成的一種蟲菌復合體。冬蟲夏草的用藥歷史始載于《本草綱目拾遺》，稱其有“補肺益腎、止血化痰之功效”，近代藥理和臨床研究表明，冬蟲夏草對調節機體免疫功能、治療慢性腎炎、慢性肝炎、慢性支氣管炎、高脂血癥和性功能障礙等多種疾病有顯著療效，具有廣闊的市場前景。

目前冬蟲夏草天然資源瀕于滅絕，被列為國家重點保護野生物種(Ⅱ級)。資源的稀少和需求的增長加劇了供不應求的矛盾，致使價格陡長，近二十年來冬蟲夏草價格漲幅為各種中藥材價格上漲幅度之冠，被人們稱為“軟黃金”。從上世紀八十年代以來，科學工作者們試圖通過以下途徑解決冬蟲夏草資源匱乏的難題，以滿足人們對冬蟲夏草增長的需要。一是冬蟲夏草偽無性型菌絲體的開發。迄今為止，從冬蟲夏草中分離出了包括中國被孢霉、中國擬青霉、蝙蝠蛾擬青霉、蟲草頭飽霉、蝙蝠蛾被飽霉、蝙蝠蛾柱霉等雜菌，這些菌的發酵產物的理化性質和一些藥理功能和冬蟲夏草的功效近似，一些企業將上述菌種進行大規模發酵生產以作為冬蟲夏草的代用品，如天賜康膠囊、金水寶膠囊、至靈膠囊、寧心寶膠囊等，但這些產品所使用的真菌在生物學和冬蟲夏草相差甚遠，在臨床功效上相差更大，因而難以替代天然冬蟲夏草，更不能作為真正的冬蟲夏草；二是開發其它蟲草代替冬蟲夏草，如蛹蟲草，盡管該產品作為新資源獲得批準上市，但其適應癥與冬蟲夏草不一致，也不為消費者所接受；三是人工培育冬蟲夏草，培育在形態和有效成分與天然冬蟲夏草一致的人工冬蟲夏草最為市場接受，此途徑是解決冬蟲夏草資源供不應求的根本方法和手段，但由于人工培育天然冬蟲夏草涉及學科多、研究周期長、部分關鍵技術有待完善并涉及《藥品注冊管理辦法》局令第28號的申報難題，真正人工產業化培育的冬蟲夏草面市仍遙遙無期；四是通過現代生物技術，利用冬蟲夏草菌種進行菌絲體發酵，實現冬蟲夏草菌的產業化，這是目前解決冬蟲夏草資源匱乏最現實的方法和手段。

冬蟲夏草為冬蟲夏草菌寄生于蝠蛾屬昆蟲體內形成的菌蟲復合體，冬蟲夏草的主要藥用活性成份源于冬蟲夏草菌的代謝產物。現代藥物化學與藥理學研究表明冬蟲夏草菌絲體與天然冬蟲夏草具有相近的化學成分，具有相似的藥理作用。因此，進行冬蟲夏草菌的液態深層發酵生產冬蟲夏草菌絲體以代替天然的冬蟲夏草，不僅可以緩解野生冬蟲夏草資源的壓力，還可滿足人們對冬蟲夏草健康保健功能的需求。

冬蟲夏草菌是一種嗜低溫型真菌，其生長溫度低于20℃。當培養溫度為20℃-22℃時，冬蟲夏草菌絲體生長極其緩慢且菌落形成小；當培養溫度高于23℃時，菌絲體幾乎不生長。同時，冬蟲夏草菌對培養基營養的要求亦較高，即使在最適培養溫度條件下在普通真菌培養基上菌絲體生長也很緩慢，菌絲體得率低。按工廠化發酵模式生產冬蟲夏草菌絲體由于發酵溫度低、生長緩慢、培養周期長，通常由于雜菌的染污而以失敗告終，發酵成本高。目前，國內已有多家單位進行了冬蟲夏草菌的液態培養研究，但是其發酵菌絲體產物經分子生物學鑒定后均不是真正的冬蟲夏草菌。

相對于動物、植物而言，真菌容易變異和退化，在冬蟲夏草菌液態培養過程中，一般采用斜面種到液體種的多級發酵培養模式，斜面菌種經過反復轉管傳代，菌種退化較嚴重(從最開始分離的母種轉管約15代就開始衰退)，在斜面培養基上生長表現為菌絲體生長緩慢、易老化自溶，經制種后在液體培養基內發酵菌絲體稀疏、菌球顆粒大表面極光滑，菌球傳質傳氧差，生物量得率低，有效成分含量低。造成此種現象的因素有很多，大體可分為兩類：一是菌株由于生理功能基因的喪失導致自身的遺傳學特性發生改變造成菌種的衰退；二是傳代次數、培養條件、環境因子等人為因素造成的菌種衰退。在培養過程中，菌種衰退、絲狀菌絲體生長勢弱是制約冬蟲夏草菌發酵產業化的一大瓶頸。因此，在冬蟲夏草菌的發酵生產過程中采取優化的遴選措施恢復菌種的優良特性，以解決冬蟲夏草菌發酵產業化過程中的菌種衰退致生物量及有效成分含量低這一瓶頸問題，實現冬蟲夏草菌的可持續、穩定生產。