[發明專利]一種快速診斷試紙及其制備方法

有效

• 申請號: 201410449056.5
• 申請日: 2014-09-04
• 公開（公告）號: CN104198699A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 岳朋;周錦源;盛威瑋
• 申請（專利權）人: 深圳市領治醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市精英專利事務所 44242
• 代理人: 任哲夫

技術領域

本發明涉及體外檢測技術領域，尤其涉及一種快速診斷試紙及其制備方 法。

背景技術

目前，心血管疾病、肝臟疾病、腎臟疾病、糖尿病以及腫瘤等各類疾病 的發病率逐年升高，人們已經意識到，疾病的快速診斷和早期發現已經變得 越來越重要。科學家們為此進行眾多的嘗試和突破，如基因芯片技術,放射 性免疫試驗、酶聯免疫技術等，但是由于這些方法需要專業人員操作，并且 操作復雜，步驟繁瑣，甚至有的還有放射性物質參與，因此，很難有效地早 期快速診斷疾病。然而，快速診斷試紙是一種熱門的快速早期診斷疾病的重 要方法，其具備快速、低成本、操作簡單，不需要專業技術人員等特點。

傳統的快速診斷試紙通過膠體金顆粒來實現最終的顯色反應。市場上的 膠體金顆粒在100nM左右，其靈敏度較酶聯免疫技術差很多，因此，一些研 究者通過制備更小的膠體金顆粒來增加靈敏度，雖然這是一種不錯的提高快 速診斷試紙靈敏度的方法，但該方法對靈敏度的提高有限，與理想的靈敏度 仍有較大差距，且更小的膠體金顆粒會增加生產難度，提高生產成本。

目前，遠紅外納米顆粒技術主要用于精密性要求很高的western-blot 的免疫印跡的基礎研究中，由于其工藝的復雜性和精細性，很難在便攜性快 速疾病診斷試紙中應用。

發明內容

本發明針對現有的快速診斷試紙的靈敏度低、信號不穩定、抗干擾能力 差等問題，提供一種利用遠紅外納米熒光顆粒來實現顯色反應，且信號穩定、 抗干擾能力強、不受外界光線干擾、靈敏度高的快速診斷試紙，以及該種快 速診斷試紙的制備方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案，

一種快速診斷試紙，包括底板，以及設于底板上且依次緊密相連的樣品 墊、結合墊、反應膜和吸收墊，所述反應膜上設有檢測區和質控區，所述結 合墊上包被有硝基酪氨酸抗體-熒光顆粒標記物；所述檢測區上包被有能與 待測抗原特異性結合的抗體；所述質控區上包被有能與硝基酪氨酸抗體特異 性結合的抗原。

進一步說，所述硝基酪氨酸抗體-熒光顆粒標記物中，熒光顆粒的粒徑 ≤40nm，熒光顆粒的熒光波長為680-720nm或780-820nm。

進一步說，所述樣品墊、結合墊、反應膜和吸收墊分別經過硝基化處理， 經硝基化處理后分別為硝基化樣品墊、硝基化結合墊、硝基化反應膜、硝基 化吸收墊。

進一步說，所述檢測區上能與待測抗原特異性結合的抗體的包被量為 10-1000ng/cm²。

進一步說，所述質控區上能與硝基酪氨酸抗體特異性結合的抗原的包被 量為10-1000ng/cm²。

以上所述快速診斷試紙的制備方法，包括以下步驟：

S1、在室溫下將熒光顆粒溶液與SMCC溶液混合，溶液中熒光顆粒與SMCC 的質量比為0.1-0.15:48-96，靜置0.5-1.5h，得混合液；然后除去混合液 中的鹽，并向混合液中加入pH為7.0-7.4的磷酸鹽緩沖液使混合液中熒光 顆粒的質量體積濃度為100-300ng/mL，得準備液。

S2、在室溫下，將10-20體積濃度為200-400ng/mL的硝基酪氨酸抗體 溶液與1體積的準備液混合并靜置20-50min，然后除去溶液中的鹽，得預備 液；向預備液中加入2-巰基乙醇以猝滅硝基酪氨酸抗體與熒光顆粒的結合反 應，并用pH為7.0-7.4的磷酸鹽緩沖液將預備液稀釋10-160倍，得硝基酪 氨酸抗體-熒光顆粒標記物噴涂液。

S3、將第一玻璃纖維塊、第二玻璃纖維塊、反應膜和吸收墊依次緊密固 定于底板上；然后將硝基酪氨酸抗體-熒光顆粒標記物噴涂液噴涂于第二玻 璃纖維塊上，形成結合墊；將能與待測抗原特異性結合的抗體噴涂于反應膜 上，形成檢測區；將能與硝基酪氨酸抗體特異性結合的抗原噴涂于反應膜上 形成質控區；所述檢測區位于質控區與結合墊之間；由第一玻璃纖維塊形成 樣品墊；得初型試紙。