[發明專利]一種從臍血中分離造血干細胞的裝置和方法

有效

• 申請號: 201410449007.1
• 申請日: 2014-09-05
• 公開（公告）號: CN104195037A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 遲令龍;李棟
• 申請（專利權）人: 山東省齊魯干細胞工程有限公司
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;C12N5/0789
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 賈波

技術領域

本發明涉及一種從臍血中分離造血干細胞的裝置和方法。

技術背景

造血干細胞(Hematopoieticstemcells，HSCs)是一類存在于造血組織中的多能干細胞，可以定向分化、增殖為不同的血細胞系，并進一步生成血細胞。造血干細胞廣泛地應用于治療血液系統疾病、自身免疫性疾病和某些實體腫瘤等。造血干細胞根據來源又可分為骨髓造血干細胞、外周血造血干細胞和臍血造血干細胞。與骨髓和外周血造血干細胞相比，臍血造血干細胞更為原始，自我增殖能力最強，且臍血具有采集方便、細胞免疫不成熟、移植過程中不需要嚴格配型等優點，因而臍血造血干細胞具有極大的臨床應用價值。

臍血造血干細胞在體外的分離效果直接關系到采集物中造血干細胞的數量和移植物受者的造血重建。目前，臍血庫制備造血干細胞均采用離心壓漿分離法，該方法需要大型離心機、壓漿分離夾，耗時較長、操作復雜、效率低下。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供了一種從臍血中分離造血干細胞的裝置及其使用方法，本發明的裝置簡單、設計科學、使用方法簡便、用時短、效率高、回收率高。

本發明的一種從臍血中分離造血干細胞的裝置，包括采血袋、血漿袋、紅細胞收集袋、洗脫液袋、干細胞收集袋、白細胞過濾器和加壓泵，采血袋通過帶有1#閥門的連接管和采血裝置連接；采血袋和血漿袋之間通過帶有2#閥門的連接管連接在2#閥門和血漿袋之間還設有1#凝塊過濾網；采血袋和洗脫液袋之間通過連接管連接，該連接管上依次設有3#閥門、2#凝塊過濾網、白細胞過濾器和5#閥門；2#凝塊過濾網和白細胞過濾器之間設有帶7#閥門的支管，該支管與干細胞收集袋相連；在白細胞過濾器和5#閥門之間設有帶6#閥門的支管，該支管與紅細胞收集袋相連；在6#閥門和連接管之間設有支管，該支管通過加壓泵、4#閥門和血漿袋相連。

所述的，白細胞過濾器的濾膜為尼龍濾膜或為玻璃纖維濾膜，孔徑為80μm-120μm。

優選的，白細胞過濾器的濾膜為尼龍濾膜，孔徑為100μm。

一種采用本發明的裝置分離造血干細胞的方法，包括以下步驟：

a.?打開1#閥門，臍血采集裝置采集正常孕婦順產的新生兒臍血全血，臍血經由連接管進入采血袋中，關閉1#閥門；

b.?采血袋中臍血全血分層后，得上層血漿、中層白細胞和下層紅細胞，打開2#閥門，上層血漿經1#凝塊過濾網過濾，血漿經由連接管進入血漿袋備用，關閉2#閥門；

c.?打開3#閥門和6#閥門，采血袋中臍血剩余部分經2#凝塊過濾網和白細胞過濾器過濾，紅細胞及剩余血漿經由連接管進入紅細胞收集袋，關閉3#閥門和6#閥門；

d.?打開5#閥門，洗脫液袋中的洗脫液逆向灌注到白細胞過濾器中，關閉5#閥門；

e.?孵育完畢，打開4#閥門和7#閥門，加壓泵對血漿袋中的血漿加壓，經由連接管快速逆向沖洗白細胞過濾器，經由連接管進入干細胞收集袋，關閉4#閥門和7#閥門，得造血干細胞；

f.?在造血干細胞中加注細胞冷凍保護劑，程序降溫冷凍液氮保存。

所述的，洗脫液是在PBS溶液中加入以下質量分數的組分構成的：0.3%-0.4%枸櫞酸、2.0%-3.0%枸櫞酸鈉、3.0%-4.0%葡萄糖、0.02%-0.04%腺嘌呤、0.9%-2.0%NaCl、0.20%-0.30%胰蛋白酶和0.2%-2.0%乙二胺四乙酸，洗脫液的流速為1-3ml/min。

所述的，洗脫液的體積為10-30ml，溫度為35-40℃，洗脫液灌注到白細胞過濾器中，需震蕩孵育5-15min。

優選的，洗脫液是由PBS溶液加入以下重量比的物質組成：0.3%枸櫞酸、3.0%枸櫞酸鈉、4.0%葡萄糖、0.03%腺嘌呤、1.5%NaCl、0.30%胰蛋白酶和1.0%乙二胺四乙酸，洗脫液的流速為2ml/min。?

優選的，洗脫液的體積為20ml，溫度為37℃，洗脫液灌注到白細胞過濾器（7）中，需震蕩孵育10min。

本發明具有如下優點：

（1）本發明的裝置簡單，使用方法簡便，所得造血干細胞回收率為83%以上，造血干細胞活性高，用時短，回收效率高；

（2）本發明的裝置設計科學，利用抑制白細胞吸附作用和細胞形態變化的原理，將抓附在尼龍濾膜上的白細胞進行洗脫，為臍血造血干細胞分離提供一個新的方法，具有較好的實際應用價值和推廣價值。

附圖說明

圖1為本發明一種從臍血中分離造血干細胞的裝置。