[發(fā)明專利]一種從臍血中分離造血干細(xì)胞的裝置和方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410449007.1 | 申請(qǐng)日： | 2014-09-05 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104195037A | 公開（公告）日： | 2014-12-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 遲令龍;李棟 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東省齊魯干細(xì)胞工程有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12M1/12 | 分類號(hào)： | C12M1/12;C12N5/0789 |
| 代理公司： | 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218 | 代理人： | 賈波 |
| 地址： | 250102 山東省濟(jì)南市*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 臍血中 分離 造血 干細(xì)胞 裝置 方法 | ||
1.一種從臍血中分離造血干細(xì)胞的裝置?，其特征在于，包括采血袋（1）、血漿袋（2）、紅細(xì)胞收集袋（3）、洗脫液袋（4）、干細(xì)胞收集袋（5）、白細(xì)胞過濾器（7）和加壓泵（8），采血袋（1）通過帶有1#閥門（71）的連接管（91）和采血裝置連接；采血袋（1）和血漿袋（2）之間通過帶有2#閥門（72）的連接管（92）連接，連接管（92）在2#閥門（72）和血漿袋（2）之間還設(shè)有1#凝塊過濾網(wǎng)（61）；采血袋（1）和洗脫液袋（4）之間通過連接管（93）連接，連接管（93）上依次設(shè)有3#閥門（73）、2#凝塊過濾網(wǎng)（62）、白細(xì)胞過濾器（7）和5#閥門（75）；2#凝塊過濾網(wǎng)（62）和白細(xì)胞過濾器（7）之間設(shè)有帶7#閥門（77）的支管（94），支管（94）與干細(xì)胞收集袋（5）相連；在白細(xì)胞過濾器（7）和5#閥門（95）之間設(shè)有帶6#閥門（76）的支管（96），支管（96）與紅細(xì)胞收集袋（3）相連；在6#閥門（76）和連接管（93）之間設(shè)有支管（95），支管（95）通過加壓泵（8）、4#閥門（74）和血漿袋（2）相連。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述白細(xì)胞過濾器（7）的濾膜為尼龍濾膜或?yàn)椴ＡЮw維濾膜，孔徑為80μm-120μm。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的裝置，其特征在于，所述白細(xì)胞過濾器（7）的濾膜為尼龍濾膜，孔徑為100μm。
4.一種采用權(quán)利要求1所述裝置分離造血干細(xì)胞的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
a.?打開1#閥門（71），臍血采集裝置采集正常孕婦順產(chǎn)的新生兒臍血全血，臍血經(jīng)由連接管（91）進(jìn)入采血袋（1）中，關(guān)閉1#閥門（71）；
b.?采血袋（1）中臍血全血分層后，得上層血漿、中層白細(xì)胞和下層紅細(xì)胞，打開2#閥門（72），上層血漿經(jīng)1#凝塊過濾網(wǎng)（61）過濾，血漿經(jīng)由連接管（92）進(jìn)入血漿袋（2）備用，關(guān)閉2#閥門（72）；
c.?打開3#閥門（73）和6#閥門（76），采血袋（1）中臍血剩余部分經(jīng)2#凝塊過濾網(wǎng)（62）和白細(xì)胞過濾器（7）過濾，紅細(xì)胞及剩余血漿經(jīng)由連接管（93）進(jìn)入紅細(xì)胞收集袋（3），關(guān)閉3#閥門（73）和6#閥門（76）；
d.?打開5#閥門（75），洗脫液袋（4）中的洗脫液逆向灌注到白細(xì)胞過濾器（7）中，關(guān)閉5#閥門（75）；
e.?孵育完畢，打開4#閥門（74）和7#閥門（77），加壓泵（8）對(duì)血漿袋（2）中的血漿加壓，經(jīng)由連接管（95）、連接管（96）和連接管（93）快速逆向沖洗白細(xì)胞過濾器（7），經(jīng)由連接管（94）進(jìn)入干細(xì)胞收集袋（5），關(guān)閉4#閥門（74）和7#閥門（77），得造血干細(xì)胞；
f.?在造血干細(xì)胞中加注細(xì)胞冷凍保護(hù)劑，程序降溫冷凍液氮保存。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的使用方法，其特征在于，所述洗脫液是在PBS溶液中加入以下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分構(gòu)成的：0.3%-0.4%枸櫞酸、2.0%-3.0%枸櫞酸鈉、3.0%-4.0%葡萄糖、0.02%-0.04%腺嘌呤、0.9%-2.0%NaCl、0.20%-0.30%胰蛋白酶和0.2%-2.0%乙二胺四乙酸，洗脫液的流速為1-3ml/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的使用方法，其特征在于，所述洗脫液的體積為10-30ml，溫度為35-40℃，洗脫液灌注到白細(xì)胞過濾器（7）中，需震蕩孵育5-15min。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種從臍血中分離造血干細(xì)胞的方法，其特征在于，所述洗脫液是由PBS溶液加入以下重量比的物質(zhì)組成：0.3%枸櫞酸、3.0%枸櫞酸鈉、4.0%葡萄糖、0.03%腺嘌呤、1.5%NaCl、0.30%胰蛋白酶和1.0%乙二胺四乙酸，洗脫液的流速為2ml/min。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述洗脫液的體積為20ml，溫度為37℃，洗脫液灌注到白細(xì)胞過濾器（7）中，需震蕩孵育10min。
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