[發明專利]一種細胞色素P450酶的特異性探針底物組合物及其應用

無效

• 申請號: 201410446334.1
• 申請日: 2014-09-03
• 公開（公告）號: CN104195218A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 張素行;張飛鵬;葉沛珍;陳濤;龍娜;張科之;黃曉勇
• 申請（專利權）人: 廣東中西達一新藥開發有限公司
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;G01N30/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;楊晞

技術領域

本發明涉及酶學和生物分析技術領域，具體涉及一種特異性探針底物組合物及其應用，尤其涉及一種細胞色素P450酶的特異性探針底物組合物及其在細胞色素P450酶亞型酶活檢測中的應用。

背景技術

細胞色素P450(CYP450)酶分布于肝臟、小腸和腎臟，其中CYP1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4等亞型與外源性物質(如藥物)代謝清除密切相關，參與90％的藥物代謝。在新藥研發過程中，可以通過這些CYP450酶的探針底物在體外代謝體系(如人肝微粒體等)生成特異性代謝產物的速率，判斷藥物是否會抑制特定的CYP酶亞型，進而推斷該藥物是否會引起體內藥物間相互作用，降低藥效或增加毒性。

近年來，對高通量藥物篩選的需求日益增加，目前，用于研究CYP活性的方法主要中，“cocktail”探針藥物法較為常見，但其仍有很多不足之處，如構成該cocktail的幾種藥物在共同孵育時可能存在著相互作用，而且對分析方法的靈敏度和特異性要求較高，這樣就會提高分析成本。

隨著組合化學和高通量篩選手段的采用，需要進行CYP450酶抑制作用篩選的化合物急劇增多，而目前由于分析方法(如高效液相、紫外或熒光)的靈敏度限制，每次分析僅能預測化合物對單個酶的抑制作用，耗時低效。

因此，尋找一種可靠的混合探針底物和高靈敏度的分析方法是目前亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種特異性探針底物組合物及其應用，特別是一種細胞色素P450酶的特異性探針底物組合物及其在細胞色素P450酶亞型酶活檢測中的應用。

為達到此發明目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種細胞色素P450(CYP450)酶的特異性探針底物組合物由非那西丁、香豆素、安非他酮、右美沙芬、雙氯酚酸和睪酮中的至少兩種組成。本發明的特異性探針底物組合物例如可以是：非那西丁與香豆素、安非他酮、右美沙芬、雙氯酚酸或睪酮中任意一種或至少兩種的組合，或者，香豆素與非那西丁、安非他酮、右美沙芬、雙氯酚酸或睪酮中任意一種或至少兩種的組合等等，優選為非那西丁、香豆素、安非他酮、右美沙芬、雙氯酚酸和睪酮的組合物。

其中，所述非那西丁的濃度為7.5-30μM，例如可以是：7.5μM、8.5μM、10.5μM、12.5μM、15μM、18μM、20μM、23μM、25μM、30μM，優選為15-25μM，更優選為15μM。

所述香豆素的濃度為1.25-5μM，例如可以是1.25μM、1.5μM、2.0μM、2.25μM、2.5μM、2.75μM、3μM、3.5μM、4μM、4.5μM、5μM，優選為1.25-3.5μM，更優選為2.5μM。

所述安非他酮的濃度為2.5-10μM，例如可以是2.5μM、3μM、3.5μM、4μM、4.75μM、5μM、5.25μM、6.5μM、7μM、7.5μM、8μM、8.25μM、8.5μM、9μM、9.5μM、10μM，優選為3.5-8μM，更優選為5μM。

所述右美沙芬的濃度為2.5-10μM，例如可以是2.5μM、3μM、3.5μM、4μM、4.5μM、5μM、5.25μM、6.5μM、7μM、7.5μM、8μM、8.25μM、8.5μM、9μM、9.5μM、10μM，優選為3.5-8μM，更優選為5μM。

所述雙氯酚酸的濃度為2.5-10μM，例如可以是2.5μM、3μM、3.5μM、4μM、4.5μM、5μM、5.25μM、6.5μM、7μM、7.5μM、8μM、8.25μM、8.5μM、9μM、9.5μM、10μM，優選為3.5-8μM，更優選為5μM。

所述睪酮的濃度為5-20μM，例如可以是5μM、6.5μM、8μM、10μM、12μM、15μM、16μM、17μM、18μM、20μM，優選為8-18μM，更優選為10μM。

第二方面，本發明還提供了如本發明第一方面所述的特異性探針底物組合物在檢測細胞色素P450酶6種亞型酶活性的應用。

本發明的細胞色素P450酶可以是來源于肝、腎和胃腸道等含有P450酶的細胞和亞細胞器，如肝細胞、微粒體和S9等。

作為優選技術方案，本發明的應用包括利用如本發明第一方面所述的特異性探針底物組合物檢測細胞色素P450酶6種亞型的抑制作用。

在進行檢測時，可以結合液相色譜-質譜聯用技術同時進行，或者采用高效液相色譜等檢測手段，都可以實現對細胞色素P450酶6種亞型的抑制作用。