[發明專利]同源四倍體七葉一枝花植株的培育方法

有效

• 申請號: 201410445856.X
• 申請日: 2014-09-03
• 公開（公告）號: CN104160962A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 王曉娟
• 申請（專利權）人: 無錫中農科生物育種技術研究院有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及同源四倍體七葉一枝花植株的培育方法，屬于藥用植物育種領域。

背景技術

七葉一枝花為百合科重樓屬多年生草本植物，野生環境下生于海拔1800～3200米的林下，山坡林下蔭處或溝邊的陰濕處，分布于我國云南、四川、貴州、廣東、廣西、江西、福建等省。以干燥根莖入藥，中藥名為重樓、七葉蓮、燈臺七等。根莖含多種甾體皂苷、生物堿和氨基酸。中醫認為，其性味苦微寒，有清熱解毒、消腫止痛、息風定驚、平喘止咳等功效，常用來治療流行性乙型腦炎，胃痛，闌尾炎，淋巴結結核，扁桃體炎，腮腺炎，乳腺炎，跌打損傷、蛇蟲咬傷、淋巴結核、骨髓炎等，是云南白藥的主要成分之一。由于該藥藥用價值高，民間采挖嚴重，野生資源已日益枯竭。雖然近幾年來已開展人工種植，但由于引種的野生品種存在生長緩慢，生長周期長，藥材產量低，短時間內還難以滿足市場醫用需求，因此培育出七葉一枝花性狀優良的新品種，才能從根本上解決市場藥材短缺的問題，也是保證七葉一枝花藥材種植業持續健康發展的重要措施。

誘導植物多倍體的形成，是加大植物遺傳變異，改良植物品性的重要手段。多倍體藥用植物一般具有根、莖、葉和花果的巨型性，抗逆性強，藥用成分含量高等特性。這正是藥材優質、高產育種所期望達到的目標。因此培育七葉一枝花同源四倍體新品種，可以解決藥材品種性狀改良的問題，同時從根本上解決目前藥材產量低、市場需求量短缺的問題。

單倍體是指體細胞中含有本物種配子染色體數的生物個體。而一倍體是指體細胞含一個染色體組的個體。絕大多數生物為二倍體生物，其單倍體的體細胞中含一個染色體組，如果原物種本身為多倍體，那么它的單倍體的體細胞中含有的染色體組數一定多于一個。如四倍體水稻的單倍體含兩個染色體組，六倍體小麥的單倍體含三個染色體組。多倍體就是指體細胞中含有三個以上染色體組的生物個體。同源多倍體是由原來的染色體組加倍形成的多倍體。鑒于此，在進行同源四倍體七葉一枝花植株的培育過程中，就要確實保證細胞內的染色體數呈整數加倍，而不是單單指染色體數的簡單增多，否則得到的多倍體只是雜合體(染色體數不規律增加)或嵌合體(含有不同倍性的各種細胞)，而且此類多倍體在繼代增殖過程中往往會發生回復突變，且性狀不穩定。為了得到純合同源四倍體七葉一枝花植株，本發明在四倍體植株誘導條件等方面做了細化和改進，并成功實現組培四倍體植株的溫室移栽，通過大量實驗摸索出了一套培育純合同源四倍體七葉一枝花植株的方法。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種同源四倍體七葉一枝花植株的培育方法。通過此方法可快速實現同源四倍體七葉一枝花植株的培育，進而有效提高其活性成分的含量，克服七葉一枝花在自然繁殖和人工種植中出現的品種退化問題。

本發明是通過以下技術方案實現的：

同源四倍體七葉一枝花植株的培育方法，步驟如下：

(1)繁育組培苗：取性狀優良的七葉一枝花植株的葉芽，通過植物組織培養技術，繁育出組培苗(該步所涉及的技術為常規技術)；

(2)秋水仙素處理：用以下兩種方法之一處理：

①在無菌條件下，選取生長勢強的組培繼代苗，在莖部造成若干(2～5個)創傷(所述創傷是指用器械輕輕劃傷)，然后用脫脂棉包裹嚴密，再在脫脂棉上滴入質量濃度為0.03％～0.05％的秋水仙素溶液浸潤，在分化培養基上培養10～15天后，用無菌水洗凈，切成單芽后轉接到叢生芽誘導培養基中；

②將組培苗轉接至添加質量濃度為0.05％～1.0％的秋水仙素的分化培養基中，培養20～30天后，切成單芽轉接至叢生芽誘導培養基中；

所述分化培養基的組份組成為：MS+BA?0.5～0.8mg/L+GA₃?0.1～0.5mg/L+NAA?0.1～0.3mg/L+CTK(細胞分裂素)0.3～0.5mg/L(即：向MS培養基中加入終濃度為0.5～0.8mg/L的BA、0.1～0.5mg/L的GA₃、0.1～0.3mg/L的NAA以及0.3～0.5mg/L的CTK而成；該表述方式為所屬領域技術人員慣用的表述方式；下同；所述MS培養基為現有技術中常用的培養基)；

所述在分化培養基中培養的培養條件為：溫度25～30℃，每天日照8～12h，光照強度60μmol·m^-2·s^-1；

所述叢生芽誘導培養基的組分組成為：MS+BA?1.5～2.0mg/L+GA₃?0.1～0.5mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖20～30g/L；