[發明專利]一種滑桃樹新的分離純化方法

在審

• 申請號: 201410445588.1
• 申請日: 2014-09-04
• 公開（公告）號: CN104193763A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 張金芳;楊存
• 申請（專利權）人: 南京標科生物科技有限公司
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明屬于植物有效成分提取技術領域，涉及一種滑桃樹新的分離純化方法。

背景技術

滑桃樹新（Trewiasine），分子式為C₃₇H₅₂ClN₃O₁₁，分子量為750.29，mp.173-175℃，是從大戟科(Euphorbiaceae)?Isothecium?subdiversoforme?滑桃樹?Trewia?nudiflora?L.種子中分離得到的一種生物堿類活性物質。實驗研究表明，滑桃樹新具有廣泛的生理活性，2.5μg/kg時，對小鼠艾氏癌的延命率為183%，2.5～10μg/kg時，對P388白血病小鼠的治愈率為56%-75%。對多種實驗動物腫瘤如：腹水型S180、肝癌、U14及Lewis肺癌等均有明顯療效。對4種人體腫瘤細胞有明顯細胞毒活性，尤以U937最為敏感，1μg/mL時，抑制率>90%。

目前尚未見滑桃樹新的提取純化方法方面的報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種滑桃樹新的分離純化方法，該方法能夠提取分離得到高含量的滑桃樹新晶體，方法簡單可行、晶型好。

本發明的分離純化技術方案如下：

一種滑桃樹新的分離純化方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）提?。簩⒃纤幉姆鬯?，加入飽和石灰水浸泡4-8小時，然后用乙醇溶液回流提取，減壓回收乙醇，得到提取濃縮液；

（2）大孔樹脂柱層析：將提取濃縮液加水分散，再通過大孔吸附樹脂吸附柱中，柱徑高比為1:8-1:20，室溫下以30-95%乙醇梯度洗脫，收集滑桃樹新洗脫液，減壓蒸餾回收乙醇，得乙醇洗脫液；

（3）氧化鋁柱層析：將乙醇洗脫液加入氧化鋁柱頂端，以乙酸乙酯-乙醇混合溶液梯度洗脫，收集滑桃樹新流分，減壓回收試劑至有沉淀析出，放置沉淀；

（4）重結晶：將步驟（3）所得沉淀物用無水乙醇回流溶解，過濾，結晶，二氯甲烷-丙酮重結晶得滑桃樹新。

所述步驟（2）中30-95%乙醇梯度洗脫，先用30-55%乙醇洗脫，再用80-95%乙醇洗脫，收集80-95%乙醇洗脫液，洗脫流速為1-2.5BV/h，洗脫用量為3-6BV。

所述步驟（3）中氧化鋁柱為中壓柱，氧化鋁為100-300目的中性氧化鋁。

所述步驟（3）中乙酸乙酯-乙醇溶液梯度洗脫按乙酸乙酯-乙醇體積比1:0、1:1、1:3、1:5依次洗脫。

所述步驟（4）中二氯甲烷-丙酮體積比為5:1。

本發明的有益效果是：本發明采用大孔樹脂和中壓氧化鋁柱層析結合，分離效果好，上樣量大，生產周期短；通過無水乙醇結晶，二氯甲烷-丙酮重結晶，所得產品晶型好；所用試劑毒性較低，是一種高效、低污染、低耗能的分離純化滑桃樹新的方法。

具體實施方式

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

實施例1：

將滑桃樹種子干燥、粉碎，取5kg投入提取罐中，加入5倍量飽和石灰水室溫浸泡5h，然后加入4倍量75%乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并提取液，提取液減壓回收乙醇，得到提取濃縮液，加水分散，通過大孔吸附樹脂柱（柱徑高比為1:10），室溫條件下先用40%乙醇洗脫，再用85%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，減壓蒸餾回收乙醇，取200-300目的中性氧化鋁裝柱，將乙醇洗脫濃縮液從頂端注入，加壓條件下將乙酸乙酯-乙醇混合溶液按體積比1:0、1:1、1:3、1:5依次注入柱中，收集滑桃樹新流分，減壓回收試劑至有沉淀析出，放置沉淀，濾出沉淀，用無水乙醇回流溶解，結晶，再以二氯甲烷-丙酮（5:1）重結晶，干燥得滑桃樹新576mg，含量95.7%。

實施例2：