[發明專利]一種煙草角斑病菌的分子鑒定引物及鑒定方法

有效

• 申請號: 201410445480.2
• 申請日: 2014-09-03
• 公開（公告）號: CN104212896A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 萬秀清;喬嬋;李若;李麗杰;王春軍;元野;賀國強;顏培強;李尊強;郭思達;孫宏偉;焦玉生;李恒全;邱恩建;劉德育;陳榮平;黃磊;張海霞;劉偉;魏繼承
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司黑龍江省公司牡丹江煙草科學研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.一組煙草角斑病菌的分子鑒定引物，其特征在于，該引物如序列表SEQ?ID?NO：1至SEQ?ID?NO：2所示，其中，序列SEQ?ID?NO：1為鑒定煙草角斑病菌的上游引物，序列SEQ?ID?NO：2為鑒定煙草角斑病菌的下游引物。

2.一種煙草角斑病菌的鑒定方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)煙草角斑病菌分離培養；

(2)PCR擴增；其中，PCR擴增時的引物為序列SEQ?ID?NO：1所示的用于鑒定煙草角斑病菌的上游引物，序列SEQ?ID?NO：2所示的用于鑒定煙草角斑病菌的下游引物；

(3)PCR擴增產物分離及結果判別。

3.根據權利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，煙草角斑病菌分離培養的具體步驟為：用滅菌的剪刀將煙草角斑病疑似病葉病斑剪下，消毒后置于LB固體培養基中25℃培養2-3天，收集病斑周圍長出的細菌菌落于無菌的LB液體培養基中，混勻后，吸取菌液涂LB固體平板，25℃培養2-3天，挑取單菌落于LB液體培養基中，25℃培養，用于PCR檢測，或者直接用滅菌牙簽蘸取單菌落用于PCR檢測。

4.根據權利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，PCR擴增產物分離及結果判別的具體步驟為：將PCR擴增產物用1.5％瓊脂糖電泳分離，于紫外分析儀中根據擴增產物的大小判定結果。