[發明專利]一種人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條及其制備方法

有效

• 申請號: 201410442757.6
• 申請日: 2014-09-02
• 公開（公告）號: CN104181298A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 秦志浩;陳艷;董瑞臻
• 申請（專利權）人: 秦志浩
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 常州市維益專利事務所 32211
• 代理人: 何學成

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域，具體涉及一種人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條及其制備方法。

背景技術

人類副流感病毒(HPIVs)是引起兒童下呼吸道感染的一種病毒，從血清學上HPIVs可分為4型(I型到IV型)，可以造成反復發作的上呼吸道感染(如感冒和喉嚨痛)，它也能造成嚴重的反復感染的下呼吸道疾病(如肺炎，支氣管炎和細支氣管炎)，特別是在老年人中和有免疫缺陷人群中。

目前臨床上診斷HPIVs感染的方法有：先通過組織培養，再分離鑒定在細胞中的病毒或直接檢測存在于呼吸道分泌物中的病毒，其中包括使用免疫熒光試驗、PCR、酶聯免疫反應測定等方法，另外一種方法就是檢測單一血清標本中特異抗體IgM。

患者感染HPIVs病原體后，臨床癥狀出現后一周左右，血清中產生特異性抗體IgM，10-30天到達高峰，12-26周消失，當患者出現癥狀再去就診時，IgM抗體已經達到比較高的水平，因此IgM抗體陽性可作為急性期感染的診斷指標。目前比較先進的一種檢測方法是用免疫熒光法進行檢測，但是該檢測方法每次只能檢測相應的一種物質，敏感性較差，效果有時不理想。

所以快速高效地檢驗人類副流感病毒IgM抗體的方法在臨床上有一定的研究意義。

發明內容

本發明解決的技術問題就是提供一種快速高效地檢驗人體血清中人類副流感病毒(HPIVs)IgM抗體的檢測試紙條及其制備方法。

本發明的技術方案為：一種人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條，該試紙條包括：含有膠體金標記的HPIVs特異性重組抗原的玻璃纖維膜、包被有二抗IgM的檢測線和包被有抗HPIVs重組抗原的多克隆抗體的質控線的硝酸纖維素膜。

進一步地，所述的二抗IgM為鼠抗人IgM多克隆抗體。

進一步地，所述HPIVs特異性重組抗原的濃度為1mg/mL，所述二抗IgM的濃度為2mg/mL，所述抗HPIVs重組抗原的多克隆抗體的濃度為1mg/mL。

所述的人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條的制備方法，包括下述步驟：

1)制備膠體金標記的HPIVs特異性重組抗原玻璃纖維膜：

(1)膠體金溶液的制備：用王水(體積比為3:1的濃HCL和濃HNO₃)浸泡容器一定時間20-30min，然后用超純水清洗干凈，烘干；向容器內加入99.14mL純水和0.86mL的2％氯金酸溶液，邊攪拌邊加熱，加熱至沸騰后繼續煮沸8min，加入2.5mL1％檸檬酸三鈉水溶液，繼續攪拌加熱10min，冷卻后加入純水至100mL，得到酒紅色膠體金溶液；其中，膠體金顆粒平均直徑在15-25nm；

(2)金標HPIVs特異性重組抗原的制備：

a.調節膠體金溶液pH:取上述制備的膠體金溶液，用0.1M的K₂CO₃溶液調節pH至8.5-9.0；

b.稀釋HPIVs特異性重組抗原：用磷酸鹽緩沖液(PB)將HPIVs特異性重組抗原稀釋至蛋白含量為0.2-0.8mg/mL；其中，所述的磷酸鹽緩沖液為：取KCL、Na₂HPO₄、KH₂PO₄共1.8g,用0.8L蒸餾水溶解，再用鹽酸調節pH，加水至總體積為1L制成；

c.膠體金與重組抗原的偶聯：取步驟b中的稀釋液0.2-1.0mL，在4℃條件下2500r/min離心30min，吸取出250μL上清液，棄去沉淀，邊攪拌邊將上清液逐滴加入到步驟a中調節好pH的膠體金溶液中，靜置10min；加入穩定劑10％BSA溶液1mL，使終濃度為1％，在4℃條件下2500r/min離心30min，靜置10min,棄上清，留沉淀物，用緩釋劑溶解，再在4℃條件下500r/min離心10min，去除聚集物，留上清液，再次將上清液在4℃條件下2500r/min離心30min，重懸底部疏松沉淀，即得到膠體金標記的HPIVs特異性重組抗原；

(3)用三維平面點膜噴金儀儀器HM3055，將標記好膠體金的HPIVs特異性重組抗原溶液均勻涂布到已經處理好的玻璃纖維素膜上，冷凍干燥，備用；

2)制備包被有二抗IgM的檢測線和包被有抗HPIVs重組抗原的多克隆抗體的質控線的硝酸纖維素膜：