[發(fā)明專利]一種人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410442757.6
• 申請日: 2014-09-02
• 公開（公告）號: CN104181298A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 秦志浩;陳艷;董瑞臻
• 申請（專利權(quán)）人: 秦志浩
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 常州市維益專利事務(wù)所 32211
• 代理人: 何學成

1.一種人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條，其特征在于，該試紙條包括：含有膠體金標記的HPIVs特異性重組抗原的玻璃纖維膜、包被有二抗IgM的檢測線和包被有抗HPIVs重組抗原的多克隆抗體的質(zhì)控線的硝酸纖維素膜。

2.如權(quán)利要求1所述的一種人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條，其特征在于所述的二抗IgM為鼠抗人IgM多克隆抗體。

3.如權(quán)利要求1或2所述的一種人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條，其特征在于所述HPIVs特異性重組抗原的濃度為1mg/mL，所述二抗IgM的濃度為2mg/mL，所述抗HPIVs重組抗原的多克隆抗體的濃度為1mg/mL。

4.一種如權(quán)利要求1至3任意一項所述的人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于，該方法包括下述步驟：

1)制備膠體金標記的HPIVs特異性重組抗原玻璃纖維膜：

(1)膠體金溶液的制備：用王水浸泡容器一定時間，然后用超純水清洗干凈，烘干；向容器內(nèi)加入99.14mL純水和0.86mL的2％氯金酸溶液，邊攪拌邊加熱，加熱至沸騰后繼續(xù)煮沸8min，加入2.5mL1％檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)攪拌加熱10min，冷卻后加入純水至100mL，得到酒紅色膠體金溶液；

(2)金標HPIVs特異性重組抗原的制備：

a.調(diào)節(jié)膠體金溶液pH:取上述制備的膠體金溶液，用K₂CO₃溶液調(diào)節(jié)pH至8.5-9.0；

b.稀釋HPIVs特異性重組抗原：用磷酸鹽緩沖液(PB)將HPIVs特異性重組抗原稀釋至蛋白含量為0.2-0.8mg/mL；

c.膠體金與重組抗原的偶聯(lián)：取步驟b中的稀釋液，在4℃條件下2500r/min離心30min，吸取上清液，棄去沉淀，邊攪拌邊將上清液逐滴加入到步驟a中調(diào)節(jié)好pH的膠體金溶液中，靜置；加入穩(wěn)定劑，在4℃條件下2500r/min離心30min，靜置,棄上清，留沉淀物，用緩釋劑重懸，即得到膠體金標記的HPIVs特異性重組抗原；

(3)用三維平面點膜噴金儀儀器HM3055，將標記好膠體金的HPIVs特異性重組抗原溶液均勻涂布到已經(jīng)處理好的玻璃纖維素膜上，冷凍干燥，備用；

2)制備包被有二抗IgM的檢測線和包被有抗HPIVs重組抗原的多克隆抗體的質(zhì)控線的硝酸纖維素膜：

將二抗IgM稀釋成2mg/mL，將抗HPIVs重組抗原的多克隆抗體稀釋成1mg/mL；用三維平面點膜噴金儀儀器HM3055，將稀釋好的二抗IgM均勻噴在硝酸纖維素膜上，得到檢測線；將稀釋好的抗HPIVs重組抗原的多克隆抗體均勻噴在硝酸纖維素膜上，得到質(zhì)控線，室溫包被過夜，封袋備用；

3)制備試紙條：

將樣品墊在封閉液中浸泡40min，烘干，封裝備用；將PVC底板、硝酸纖維素膜檢測層、樣品墊、玻璃纖維素膜和吸水墊組合，PVC底板上硝酸纖維素膜的上方粘帖吸水紙，硝酸纖維素膜與吸水紙相互交疊0.2mm，在硝酸纖維素膜的下方依次粘貼玻璃纖維膜和樣品墊，硝酸纖維素膜和玻璃纖維膜之間以及玻璃纖維膜與樣品墊之間相互交疊0.2mm，即得本發(fā)明產(chǎn)品人類副流感病毒IgM抗體檢測試紙條。