[發明專利]具有雙表達盒的谷氨酰胺合成酶高效表達載體

有效

• 申請號: 201410441296.0
• 申請日: 2014-09-02
• 公開（公告）號: CN104195173B
• 公開（公告）日: 2017-03-08
• 發明（設計）人: 胡品良;白潔;洪偉東;鄒敬;宋凌云;楊澤榮
• 申請（專利權）人: 北京比洋生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/52
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種具有雙表達盒的谷氨酰胺合成酶表達載體，該載體包括兩個表達盒，分別為第一表達盒元件和第二表達盒元件，該載體被命名為p327.7。

2.根據權利要求1所述的一種具有雙表達盒的谷氨酰胺合成酶表達載體，該載體還包含如下4種元件：f1復制子、谷氨酰胺合成酶表達盒元件、氨芐青霉素β內酰胺酶水解表達盒元件和ColE1復制子。

3.根據權利要求1或2所述的一種具有雙表達盒的谷氨酰胺合成酶表達載體，所述的第一表達盒元件、第二表達盒元件中采用的是強的增強子/啟動子；表達蛋白編碼基因分別通過多克隆位點A和多克隆位點B克隆至表達載體；谷氨酰胺合成酶表達盒元件中采用弱的啟動子/增強子；在多克隆位點A和多克隆位點B的5’端和3’端分別設計了T7?RNA聚合酶啟動子和T3?RNA聚合酶啟動子序列。

4.根據權利要求3所述的一種具有雙表達盒的谷氨酰胺合成酶表達載體，所述的多克隆位點A具有XhoI、EcoRI和MluI等3個限制性內切酶位點；所述的多克隆位點B具有XbaI、BglII和SalI等3個限制性內切酶位點。

5.根據權利要求3所述的一種具有雙表達盒的谷氨酰胺合成酶表達載體，所述的強的增強子/啟動子是CMV立早增強子/啟動子，其序列如SEQ?ID?NO：2，3，5，6所示；所述的弱的啟動子/增強子是SV40，其序列如SEQ?ID?NO：9所示；所述的T7?RNA聚合酶啟動子的序列為TAATACGACTCACTATAGG；所述的T3?RNA聚合酶啟動子的序列為GTTAATGCTTCGAGCAGACATG。

6.根據權利要求1所述的具有雙表達盒的谷氨酰胺合成酶表達載體的構建方法，其特征在于，所述的表達載體是通過全基因合成方法構建的。

7.根據權利要求1-4任一所述的表達載體用于時高效表達1-2種蛋白的用途。

8.根據權利要求1-4任一所述的表達載體用于抗體的表達中的用途。