[發明專利]基于基因沉默技術舞毒蛾幾丁質酶10基因及dsRNA

在審

• 申請號: 201410438907.6
• 申請日: 2014-09-01
• 公開（公告）號: CN104212823A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 范曉軍;趙秋勇;劉建紅;張常;糜艷霞
• 申請（專利權）人: 太原理工大學
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N15/10;C12N15/113;A01N61/00;A01P7/04
• 代理公司: 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源;武建云

1.一種舞毒蛾的幾丁質酶10基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.一種舞毒蛾的幾丁質酶10基因致死片段，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

3.一種權利要求1所述的舞毒蛾的幾丁質酶10基因的獲得方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）、PCR引物的設計

根據已知的昆蟲幾丁質酶10的氨基酸保守序列，設計了如下簡并性引物：

上游引物：CHT10F??5'-GACCTBGAYTGGGARTAYCC-3'，

下游引物：CHT10R??5'-GTCTTCRAAVGAHACCCATTGRTC-3'；

（2）、舞毒蛾總RNA的獲得

提取總RNA的具體操作步驟按照TaKaRa的Trizol試劑盒；

（3）、舞毒蛾cDNA第一鏈的合成

cDNA第一鏈的合成的操作步驟參照PrimeScriptTM?RT?reagent?Kit?with?gDNA?Eraser試劑盒；

（4）、PCR擴增

以上述cDNA第一鏈為模板，根據Taq酶說明書進行PCR擴增，將所擴增的片段進一步克隆、測序；

（5）、序列分析

利用ExPASy分析所獲得的序列，并在NCBI網站中使用BLAST功能進行序列同源性比對，確定所獲得的基因片段為舞毒蛾幾丁質酶10基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

4.一種權利要求2所述的舞毒蛾的幾丁質酶10基因致死片段的獲得方法，其特征在于：包括如下步驟：

根據權利要求3獲得的舞毒蛾幾丁質酶10基因的核苷酸序列，設計上游引物序列為SEQ?ID?NO：3，下游引物序列為SEQ?ID?NO：4；將成功連接權利要求3獲得的舞毒蛾幾丁質酶10基因的重組pEASY-T1質粒做為模板，PCR擴增獲得幾丁質酶10基因的致死片段，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示，使用MicroElute?Cycle?Pure?Kit試劑盒進行純化。

5.一種根據權利要求2所述的舞毒蛾幾丁質酶10基因致死片段合成的dsRNA。

6.權利要求5所述的利用舞毒蛾幾丁質酶5基因致死片段合成的dsRNA在致死害蟲舞毒蛾中的應用。