[發明專利]以魚下腳料浸出液培養丹麥角毛藻的培養基及培養方法

在審

• 申請號: 201410436475.5
• 申請日: 2014-09-01
• 公開（公告）號: CN104328052A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 王培磊
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種以魚下腳料浸出液為主要原料培養丹麥角毛藻的培養基，其特征在于配方如下：魚下腳料浸出液125毫升，碳酸氫銨2毫克，磷酸二氫鉀3毫克，谷氨酸鈉1毫克，苯甲酸鈉0.4毫克，海洋酵母1毫克，尿素1毫克，牛糞浸出液1毫升，蛋白粉15毫克，?；撬?0毫克，酵母鋅5毫克，酪氨酸0.5毫克，羥丙基甲基纖維素3毫克，L-精氨酸2毫克，麥飯石粉4毫克，920植物生長刺激素8國際單位，維生素S-3溶液1毫升，M-F微量元素溶液1毫升，葡萄糖酸亞鐵3毫克，蜂膠2毫克，羅漢果甜苷6毫克，硬脂酸鎂8毫克，檸檬酸2毫克，土壤浸出液1毫升，海泥浸出液1.5毫升，臭氧消毒的純凈海水1000毫升。

2.一種以魚下腳料浸出液為主要原料養殖丹麥角毛藻的方法，其特征在于具體步驟如下：

培養容器為容積65升白塑料桶，市場有售，食品級高密度聚乙烯材料制成，無縫一體式結構，堅固耐用，抗沖擊，有良好透光性，以利丹麥角毛藻進行光合作用，水桶頂部有一圓形蓋子，上有旋絲，可旋轉而密封，蓋子打上3個孔，一個孔插入充氣管，另一個孔插入排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑6毫米，還有一個孔穿入一根金屬導線，導線末端接一個40w節能燈，將塑料桶洗刷干凈，后用蒸餾水潤洗3遍，裝入權利要求1所述的培養基40升，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的丹麥角毛藻接種，接種密度5×10⁴cell/mL，蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，50厘米，頂端露出蓋子12厘米，下端通過料管與散氣石連接，用以充氣(散氣石的作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)，另一根較短，15厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，兩根玻璃管同樣粗細；用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣∶純二氧化碳∶臭氧∶甲烷＝92％∶6％∶1％∶1％，連續充氣，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室外培養，太陽光照射，最佳溫度24±2℃，最佳光照強度3000-9000Lux，夜間打開節能燈進行照明，培養的前5天，水桶上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在2000-4000Lux，避免強烈陽光對細胞造成的光傷害，第6天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養至第7天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基5升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第10天，丹麥角毛藻密度增加至700×10⁴cell/mL，停止培養，將藻液倒出，將白塑料桶洗刷干凈后，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養；

所述消毒液由以下重量比的物質組成：每100份85％乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料：土荊皮30～50份、杠板歸15～25份、黃柏15～25份、苦參5～15份、艾葉5～15份、輔料3-5份；消毒液制作方法：將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60-70℃下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30～50份、杠板歸15～25份、黃柏15～25份、苦參5～15份、艾葉5～15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85％乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2∶1∶1；將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4℃冰箱備用。

3.根據權利要求2所述的一種以魚下腳料浸出液為主要原料養殖丹麥角毛藻的方法，其特征在于，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。

4.根據權利要求2所述的一種以魚下腳料浸出液為主要原料養殖丹麥角毛藻的方法，其特征在于，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。

5.根據權利要求2所述的一種以魚下腳料浸出液為主要原料養殖丹麥角毛藻的方法，其特征在于，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。

6.根據權利要求2所述的一種以魚下腳料浸出液為主要原料養殖丹麥角毛藻的方法，其特征在于，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。