[發明專利]疏花水柏枝愈傷組織和懸浮細胞顆粒的培養方法

有效

• 申請號: 201410435123.8
• 申請日: 2014-08-30
• 公開（公告）號: CN104351046A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 劉士平;曾文;薛艷紅;孔玉珊;蔣維;秦王格格
• 申請（專利權）人: 三峽大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所 42103
• 代理人: 姜榮華

1.一種疏花水柏枝（Myricaria?laxiflora）植物愈傷組織和懸浮細胞顆粒的生產方法，包括以下步驟：

（1）得到無菌的疏花水柏枝植物體器官，比較得到體系根、莖、葉中全能性最為突出的部位，以及最適應的培養條件；（2）將無菌的莖段接種到愈傷組織培養基中誘導培養15-30天進行愈傷組織的誘導和繼代培養，得到以疏花水柏枝組織為原料的愈傷組織，誘導培養基是MS基本培養基+蔗糖?30g/L+瓊脂?7.0g/L+PVP?200-500mg/L+6-BA?0.3-0.6mg/L+2,4-D?0.1-0.4mg/L，培養基的pH值為5.9-6.1；（3）將愈傷組織接種到相應的液體培養基中振蕩培養或低溫培養，得到以疏花水柏枝器官為起源的性狀穩定的懸浮細胞顆粒。

2.根據權利要求1所述的一種疏花水柏枝（Myricaria?laxiflora）植物愈傷組織和懸浮細胞顆粒的生產方法，其特征在于：步驟（1）所述無菌的疏花水柏枝植物體器官表面消毒方法為75%乙醇30s-2?min，3%-30%NaClO?2min-5min，合適的外植體為疏花水柏枝莖段，適宜的培養基為MS培養基并加入200-500mg/L的PVP。

3.按權利要求1所述的一種疏花水柏枝（Myricaria?laxiflora）植物愈傷組織和懸浮細胞顆粒的生產方法，其特征在于：所述的植物疏花水柏枝為檉柳科（Tamaricaceae），水柏枝屬?（Myricaria）。

4.根據權利要求1所述的一種疏花水柏枝（Myricaria?laxiflora）植物愈傷組織和懸浮細胞顆粒的生產方法，其特征在于：步驟（3）所述的疏花水柏枝懸浮細胞顆粒由如下液體培養基：MS基本培養基+蔗糖?30?g/L+6-BA?0.3-0.6mg/L+2,4-D?0.1-0.4mg/L，培養7-10天開始得到懸浮顆粒，第25-35天獲得懸浮細胞。

5.根據權利要求1所述的一種疏花水柏枝（Myricaria?laxiflora）植物愈傷組織和懸浮細胞顆粒的生產方法，其特征在于：根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于：各步驟中所述的培養條件為：培養溫度25℃，光照周期為14h/d；

光照強度采取分段控制：?7:00-8:00，光照強度為1；8:00-9:00，光照強度為2；9:00-19:00，光照強度為3；19:00-20:00，光照強度為2；20:00-21:00，光照強度為3。

6.根據權利要求1所述的一種疏花水柏枝（Myricaria?laxiflora）植物愈傷組織和懸浮細胞顆粒的生產方法，其特征是：所述的步驟（3）所述的振蕩培養采用120r/min旋轉式搖床，搖瓶培養多天后得到細胞懸浮體系。