[發明專利]基于核殼量子點柔性偶聯標記物的免疫檢測試劑盒及其使用方法

無效

• 申請號: 201410432604.3
• 申請日: 2014-08-28
• 公開（公告）號: CN104215755A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 曾慶輝
• 申請（專利權）人: 中國科學院長春光學精密機械與物理研究所
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N21/64
• 代理公司: 長春菁華專利商標代理事務所 22210
• 代理人: 王丹陽

技術領域

本發明屬于免疫檢測技術領域，具體涉及一種基于核殼量子點柔性偶聯標記物的免疫檢測試劑盒及其使用方法。

背景技術

目前利用酶催化底物顯色的酶聯免疫檢測試劑盒已被大量應用，其基本原理是在試劑盒微孔板上首先包被檢測物中抗原的相應抗體，加入待測樣本后，使樣本中檢測物抗原與微孔板上包被的抗體免疫反應后結合，再加入酶標的另一抗體分子形成三明治夾心結構，最終加入底物分子通過酶的高效催化性能使得底物顯示，從而判定檢測結果。該技術是加入能夠作用于底物引起顏色變化的酶標抗體，然后加入相應酶的底物，反應一定時間后，用酶標儀測定反應產物在某一特定波長的吸光度值，再與標準樣品進行對比確定樣品中待測抗原的濃度。操作繁瑣、費時、檢測周期長、顯色不穩定。

量子點具有激發譜線寬、發射譜線窄、量子尺寸效應、高熒光效率、強光化學穩定性等特性，可以替代酶進行生物標記，用高靈敏的熒光信號代替吸收顯色進行檢測，制備基于量子點的免疫檢測試劑盒。

現有技術中，中國專利公開了一種基于量子點標記的夾心免疫檢測法及其診斷試劑盒(公開號1515909)，該試劑盒首先將量子點與抗體分子進行標記，再將量子點標記的抗體連接在抗原上，通過熒光信號進行抗原的檢測，該方法簡單快速，成本低。然而量子點是一種納米材料，具有極大的表面效應，現有的利用量子點檢測的試劑盒都是將量子點與抗體分子通過靜電吸附作用、直接共價連接等方式進行生物標記，在標記抗體的過程中，很容易標記到抗體的具有抗原決定簇部位的Fab端，標記后的抗體不能與抗原分子進行免疫反應，因而是一種無效的標記，這種直接連接技術對于最終的免疫檢測的靈敏度，尤其是特異性會有很大程度的影響，降低檢測效果，定量檢測靈敏度和特異性都無法達到滿意結果。

發明內容

本發明的目的是解決現有技術中基于量子點標記的免疫診斷試劑盒免疫檢測靈敏度低、特異性差的技術問題，提供一種基于核殼量子點柔性偶聯標記物的免疫檢測試劑盒及其使用方法。

本發明的基于核殼量子點柔性偶聯標記物的免疫檢測試劑盒，所述試劑盒包括蛋白、EDC((1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺))縮合劑、核殼量子點、能與蛋白特異性結合的待測抗原第一抗體和包被待測抗原第二抗體的微孔板；所述蛋白為蛋白G或者蛋白A，所述核殼量子點為CdTe/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnSe或CdSe/ZnS。

優選的是，所述試劑盒還包括緩沖液。

優選的是，所述包被待測抗原第二抗體的微孔板可以由微孔板和待測抗原的第二抗體替代，更進一步的，此時，所述試劑盒還包括1％的脫脂奶粉。

優選的是，所述第一抗體為乙肝表面抗體或者乙肝e抗體，第二抗體為乙肝表面抗體或者乙肝e抗體。

優選的是，所述蛋白、EDC縮合劑、核殼量子點的物質的量比為1:(100-200):1。

優選的是，所述蛋白、能與蛋白特異性結合的待測抗原第一抗體的物質的量比為1:1，所述待測抗原第二抗體的物質的量大于等于蛋白的物質的量。

本發明還提供上述基于核殼量子點柔性偶聯標記物的免疫檢測試劑盒的使用方法，包括以下步驟：

(1)將蛋白和核殼量子點在EDC縮合劑的作用下進行共價連接，得到核殼量子點標記的蛋白；

(2)將步驟(1)得到的核殼量子點標記的蛋白與能與所述蛋白特異性結合的待測抗原第一抗體混合，得到量子點抗體柔性偶聯標記產物；

(3)將含有待測抗原的待測液加入包被待測抗原第二抗體的微孔板中，進行免疫反應，洗滌后，再向微孔板中加入量子點抗體柔性偶聯標記產物，進行免疫反應，洗滌后，得到涂有標記產物的微孔板；

(4)檢測涂有標記產物的微孔板中核殼量子點的熒光強度，通過與空白樣品的熒光光譜進行對比，得到待測抗原的濃度。

優選的是，當包被待測抗原第二抗體的微孔板可以由微孔板和待測抗原的第二抗體替代時，步驟(3)前還包括，將待測抗原第二抗體加入微孔板中，反應后，加入1％的脫脂奶粉封閉微孔板的位點，洗滌，得到包被待測抗原第二抗體的微孔板。

優選的是，所述步驟(2)在23-25℃反應30-60min；所述步驟(3)中免疫反應的溫度均為37℃，時間均為0.5-1h。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：