[發明專利]多色高危HPV熒光檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410431759.5
• 申請日: 2014-08-28
• 公開（公告）號: CN104195247A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 陳華云;肖湘文;丁渭;劉淑園;陳嘉昌;方鳳銀;趙麗
• 申請（專利權）人: 廣州和實生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

技術領域

本發明涉及一種HPV熒光檢測試劑盒，特別涉及一種多色高危HPV熒光檢測試劑盒。

背景技術

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤。原位癌高發年齡為30～35歲，浸潤癌為45～55歲，近年來其發病有年輕化的趨勢。宮頸癌的早期發現和治療是有效治療宮頸癌的關鍵。

現有研究表明，宮頸癌的主要病因是由高危型人乳頭瘤病毒（Human?papillomavirus，HPV）的持續感染或反復感染所致。90%以上的宮頸癌伴有高危型HPV感染，高危型HPV持續感染是宮頸癌的主要危險因素。因此，HPV?DNA檢測在世界范圍內多個國家已經成為宮頸癌篩查和健康管理的一個重要部分。人乳頭瘤病毒有多種基因型，依據不同型別與宮頸癌發生危險性的高低可將其分為低危型和中高危型HPV。HPV?DNA檢測的主要意義在于：1）基于液基細胞學結果決定患者是否需要進一步進行陰道鏡檢查；2）液基細胞學異常而陰道鏡檢或活檢陰性患者隨訪；3）高級別宮頸上皮內病變患者臨床處理后治療結果預測；4）年齡≥30歲女性聯合巴氏涂片針對宮頸癌早期篩查。

現有的運用熒光PCR方法進行高危型人乳頭瘤病毒基因分型檢測的技術的缺點主要是擴增靈敏度低，耗時長。前期一般都需要經過步驟繁瑣的核酸提取，然后運用普通Taqman探針的方法進行多重PCR擴增，而且一般都是FAM和HEX兩通道檢測，無法具體分區高危HPV型別，難以滿足實際使用的需要。

開發出可以快速、高效的HPV高危型檢測試劑盒，具有非常實際的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種多色高危HPV熒光檢測試劑盒。

本發明所采取的技術方案是：

多色高危HPV熒光檢測試劑盒，包括熱啟動Taq酶系統、通用引物、熒光探針、陰性對照和陽性對照，熒光探針為HPV特異性MGB探針，HPV特異性MGB探針的序列如下：

探針1??TTGGCATAATCAATTATTT

探針2??TGGGGCAATCAGTTRTTTGT

探針3??CTGATTGTTCCARCARATG

探針4??AATCAGTTGTTTGTTACTGT

探針5??TTTRTTACCTGTGTTGATAC

探針6??TAACTGTTGTGGATACCAC

探針7??TATATGTTGGCACAATCAA

探針8??TGGTTACCCCAACAAATG

探針9??TAATTGATTATGCCAGCAAACA

探針10???????TTACCTGTGTTGATACYAC

探針11???????CTGATTGCCCCAACAAAT

探針12???????TATWTGTTGGCATAATCAATTA

探針13???????ACAAAYAACTGATTGCCCCA

探針14???????ACTACAGTAACAAAYAATTG

探針15???????ACAAACAACTGATTATGCCAAC

探針16???????CTCATTTGGCTACTGTAAATGCAGACAC

探針17???????TTCAGGATACTGCCCCGGACAGTAGG

探針18???????CTCCTAAATACATTGCTGGACAAAATAC；

上述探針的3’端連接有MGB，5’端連接有熒光基團，其中，三色高危HPV熒光檢測試劑盒探針1～15分別用于檢測15種常見高風險HPV基因型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82；探針16～18分別用于檢測三種少見高風險HPV基因型26、53、73。四色高危HPV熒光檢測試劑盒探針1用于檢測常見高風險HPV基因型16型；探針2用于檢測常見高風險HPV基因型18型；探針3～18分別用于檢測另外13種常見高風險HPV基因型31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82和三種少見高風險HPV基因型26、53、73。

優選的，上述多色高危HPV熒光檢測試劑盒中所使用的通用引物為：

引物1?GCMCAGGGWCATAAYAATGG

引物2?GCTCAGGGTTTAAACAATGG

引物3?GCCCAGGGCCACAATAATGG

引物4?GCNCAGGGNCACAATAATGG

引物5?GCNCAGGGNCATAACAATGG