[發明專利]用于測量細胞增殖的雙標記法

有效

• 申請號: 201410429769.5
• 申請日: 2009-05-14
• 公開（公告）號: CN104263816B
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發明（設計）人: S·克拉克;J·布拉德福
• 申請（專利權）人: 生命技術公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6809
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

1.用于測量細胞核酸合成的變化的非治療目的的方法，其包括：

a)將樣品與有效量的第一核苷或核苷酸類似物一起溫育以形成第一溫育樣品；

b)將第一溫育樣品與至少一種第二核苷或核苷酸類似物一起溫育以形成第二溫育樣品，其中所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物是競爭性核苷或核苷酸類似物，并且其中在添加所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物之前所述第一核苷或核苷酸類似物完全摻入細胞核酸，或者當所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物存在時，所述第一核苷或核苷酸類似物不摻入細胞核酸；

c)將第二溫育樣品與第一標記試劑和至少一種第二標記試劑一起溫育以形成標記的樣品；

d)檢測標記的樣品，其中測量所述第一和至少一種第二核苷或核苷酸類似物的摻入水平，

其中在與所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物一起溫育之前，不從樣品中除去所述第一核苷或核苷酸類似物，

其中將所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物的摻入水平相對于所述第一核苷或核苷酸類似物的摻入水平的差異測量為細胞核酸合成的變化，

前提是所述第一核苷或核苷酸類似物包含生物正交功能部分，并且所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物包含鹵素部分。

2.用于測量細胞DNA合成的變化的非治療目的的方法，其包括：

a)將樣品與有效量的第一核苷或核苷酸類似物一起溫育以形成第一溫育樣品；

b)將第一溫育樣品與至少一種第二核苷或核苷酸類似物一起溫育以形成第二溫育樣品，其中所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物是競爭性核苷或核苷酸類似物，并且其中在添加所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物之前所述第一核苷或核苷酸類似物完全摻入細胞DNA，或者當所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物存在時，所述第一核苷或核苷酸類似物不摻入細胞DNA；

c)將第二溫育樣品與第一標記試劑和至少一種第二標記試劑一起溫育以形成標記的樣品；

d)檢測標記的樣品，其中測量第一和至少一種第二核苷或核苷酸類似物的摻入水平，

其中在與所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物一起溫育之前，不從樣品中除去所述第一核苷或核苷酸類似物，

其中將所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物的摻入水平相對于所述第一核苷或核苷酸類似物的摻入水平的差異測量為細胞DNA合成的變化，

前提是所述第一核苷或核苷酸類似物包含生物正交功能部分，并且所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物包含鹵素部分。

3.用于測量細胞RNA合成的變化的非治療目的的方法，其包括：

a)將樣品與有效量的第一核苷或核苷酸類似物一起溫育以形成第一溫育樣品；

b)將第一溫育樣品與至少一種第二核苷或核苷酸類似物一起溫育以形成第二溫育樣品，其中所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物是競爭性核苷或核苷酸類似物，并且其中在添加所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物之前所述第一核苷或核苷酸類似物完全摻入細胞RNA，或者當所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物存在時，所述第一核苷或核苷酸類似物不摻入細胞RNA；

c)將第二溫育樣品與第一標記試劑和至少一種第二標記試劑一起溫育以形成標記的樣品；

d)檢測標記的樣品，其中測量第一和至少一種第二核苷或核苷酸類似物的摻入水平，

其中在與所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物一起溫育之前，不從樣品中除去所述第一核苷或核苷酸類似物，

其中將所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物的摻入水平相對于所述第一核苷或核苷酸類似物的摻入水平的差異測量為細胞RNA合成的變化，

前提是所述第一核苷或核苷酸類似物包含生物正交功能部分，并且所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物包含鹵素部分。

4.權利要求1的方法，其中在用所述至少一種第二核苷或核苷酸類似物進行處理的同時或在此之前，用受試化合物處理樣品。

5.權利要求1的方法，其中所述生物正交功能部分可經歷[3+2]環加成反應。

6.權利要求1的方法，其中所述生物正交功能部分可經歷Staudinger連接反應。

7.權利要求1的方法，其中所述生物正交功能部分包含疊氮基、炔烴或膦部分。