[發(fā)明專利]基因全片段快速測(cè)序方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410429092.5
• 申請(qǐng)日: 2014-08-27
• 公開（公告）號(hào): CN104232761A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王凱;汪鋒;趙倩;賈海英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢凱吉盈科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 武漢河山金堂專利事務(wù)所 42212
• 代理人: 胡清堂

1.基因全片段快速測(cè)序方法，該方法包括以下步驟：(1)采用PrimeSTAR?GXL?DNA酶，在相同PCR條件下擴(kuò)增不同基因片段,所述PCR條件優(yōu)選96℃～100℃變性5～15sec，66℃～70℃退火延伸6～10min，25～35個(gè)循環(huán)；(2)標(biāo)準(zhǔn)化PCR產(chǎn)物；(3)制備測(cè)序文庫；(4)基因測(cè)序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因全片段快速測(cè)序方法，其特征在于：步驟(1)所述基因片段為BRCA1和BRCA2基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因全片段快速測(cè)序方法，其特征在于：步驟(2)所述標(biāo)準(zhǔn)化PCR產(chǎn)物采用Agencourt?AMPure?XP?PCR試劑盒純化目的片段，使用Qubit?dsDNA?BR?Assay試劑盒標(biāo)準(zhǔn)定量DNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因全片段快速測(cè)序方法，其特征在于：步驟(3)所述文庫制備采用Nextera?XT試劑盒進(jìn)行制備。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因全片段快速測(cè)序方法，其特征在于：步驟(4)所述基因測(cè)序采用IIIumina的MiSeq平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序，使用BWA進(jìn)行比對(duì)，GATK軟件分析突變，wANNOVAR網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器注釋分析結(jié)果。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基因測(cè)序，其特征在于：IIIumina的MiSeq平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序的測(cè)序參數(shù)為2×250讀長(zhǎng)。