[發(fā)明專利]一種選擇性生產(chǎn)槐糖脂的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410428837.6
• 申請日: 2014-08-27
• 公開（公告）號: CN104178538A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳靜;張紅蕊
• 申請（專利權(quán)）人: 齊魯工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P19/12
• 分類號: C12P19/12;C12R1/645
• 代理公司: 濟南金迪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 楊磊;李寶成

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及槐糖脂的生產(chǎn)領(lǐng)域，具體地說是通過控制發(fā)酵培養(yǎng)基中金屬離子的種類生產(chǎn)不同類型槐糖脂的方法。

背景技術(shù)

槐糖脂是一類由酵母菌產(chǎn)生的糖脂類生物表面活性劑，是所有生物表面活性劑中產(chǎn)量最高的一種。槐糖脂本身無毒、無嗅、無味，對人體皮膚無刺激作用，并且能夠在自然界完全、快速地被微生物降解掉，不會對環(huán)境造成污染和破壞。因而與化學(xué)合成的表面活性劑相比，具有良好的生物相容性、可降解性、環(huán)境友好等許多優(yōu)點，可以替代化學(xué)表面活性劑應(yīng)用在石油開采、土壤修復(fù)、生物冶金、化妝品、食品、醫(yī)藥等許多領(lǐng)域。

發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液中的槐糖脂是內(nèi)酯型和酸型的混合物。內(nèi)酯型和酸型二者結(jié)構(gòu)的不同造成了生物學(xué)活性和理化特性的不同。內(nèi)酯型槐糖脂溶解度小，以結(jié)晶或油狀形式存在，易于分離，抗菌、抗腫瘤、抗炎癥反應(yīng)效果好；而酸型溶解度大，發(fā)泡和乳化性能好。這些特性決定了二者的應(yīng)用領(lǐng)域不同，如果能夠人工控制選擇性生產(chǎn)槐糖脂的類型，將會大大簡化分離工藝，降低分離成本。

近年來，對槐糖脂生產(chǎn)方法的研究已有許多文獻(xiàn)報道，比如采用不同的碳源、氮源、控制不同pH等，總槐糖脂的產(chǎn)量都大大提高。中國專利文獻(xiàn)CN101886047A(申請?zhí)枺?01010191707.7)公開了一株擬威克酵母菌株，能夠產(chǎn)生槐糖脂，但是產(chǎn)量有限，不能滿足市場要求。

目前，通過控制發(fā)酵培養(yǎng)基中金屬離子的種類選擇性生產(chǎn)槐糖脂研究和開發(fā)未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種選擇性生產(chǎn)槐糖脂的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種選擇性生產(chǎn)槐糖脂的方法，步驟如下：

(1)取擬威克酵母(Wickerhamiella?domercqiae?Y_2A?CGMCC?NO.3798)接種于培養(yǎng)基上，28～32℃活化培養(yǎng)24～48小時，得活化的擬威克酵母；

(2)將步驟(1)制得的活化的擬威克酵母接種于種子培養(yǎng)基中，28～32℃、100～200r/min培養(yǎng)20～28h，得擬威克酵母種子液；

(3)按照體積比4～6％的接種量，將步驟(2)制得的擬威克酵母種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，28～32℃、160r/min培養(yǎng)144～168小時，得發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)分離、純化，即得槐糖脂；

當(dāng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基A時，得內(nèi)酯型槐糖脂；發(fā)酵培養(yǎng)基A的組分如下：葡萄糖75～85g/L，油酸60～80mL/L，硫酸銨3～5g/L，KH₂PO₄0.8～1.2g/L，Na₂HPO₄·12H₂O0.8～1.2g/L，酵母粉1.5～3.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.4～0.6g/L，pH5.5～6.5，水定容；

當(dāng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基B時，得酸型槐糖脂；發(fā)酵培養(yǎng)基B的組分如下：葡萄糖75～85g/L，油酸60～80mL/L，硫酸銨3～5g/L，KH₂PO₄0.8～1.2g/L，Na₂HPO₄·12H₂O0.8～1.2g/L，酵母粉1.5～3.5g/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O0.04～0.06g/L，pH5.5～6.5，水定容。

根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的，步驟(1)中所述的培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基，組分如下：葡萄糖18～22g/L，酵母粉8～12g/L，蛋白胨18～22g/L，瓊脂粉18～22g/L，蒸餾水定容。

根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的，步驟(2)中所述的種子培養(yǎng)基組分如下：葡萄糖18～22g/L，酵母粉8～12g/L，蛋白胨18～22g/L，蒸餾水定容。

根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的，步驟(3)中當(dāng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基A時，所述分離純化步驟為：5000r/min轉(zhuǎn)速離心分離10分鐘，沉淀，向沉淀中加入0.5倍發(fā)酵液體積的乙酸乙酯萃取，萃取液40℃減壓干燥；

當(dāng)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基B時，所述分離純化步驟為：5000r/min轉(zhuǎn)速離心分離10分鐘，棄沉淀，向上清液中加入0.5倍發(fā)酵液體積的乙醇萃取，萃取液40℃減壓干燥；

根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的，步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基A的組分如下：