[發明專利]一種視網膜色素上皮細胞培養基及其應用

在審

• 申請號: 201410424794.4
• 申請日: 2014-08-26
• 公開（公告）號: CN104178452A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 薛志剛;范國平
• 申請（專利權）人: 同濟大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上?？剖⒅R產權代理有限公司 31225
• 代理人: 葉敏華

1.一種視網膜色素上皮細胞培養基，其特征在于，包括第一RPE細胞培養基和第二RPE細胞培養基；

所述的第一RPE細胞培養基包括以下組分，以500ml計，各組分的用量關系如下：

α修飾最小必需培養基：380-405ml；

N1補充物：5ml；

谷氨酰胺：5mL；

青霉素-鏈霉素：5mL；

非必需氨基酸：5mL；

牛磺酸：100-150mg；

氫化可的松：10-15μg；

三碘甲狀腺原氨酸：0.008-0.012μg；

熱滅活胎牛血清：75-100ml；

所述的第二RPE細胞培養基包括以下組分，以500ml計，各組分的用量關系如下：

α修飾最小必需培養基：430-455ml；

N1補充物：5ml；

谷氨酰胺：5mL；

青霉素-鏈霉素：5mL；

非必需氨基酸：5mL；

?；撬幔?5-100mg；

氫化可的松：5-10μg；

三碘甲狀腺原氨酸：0.003-0.008μg；

熱滅活胎牛血清：25-50ml。

2.根據權利要求1所述的一種視網膜色素上皮細胞培養基，其特征在于，所述的第一RPE細胞培養基或第二RPE細胞培養基的各組分在配制培養基前均通過0.22μM孔徑的過濾介質過濾，除去可能存在的雜菌。

3.一種如權利要求1所述的視網膜色素上皮細胞培養基的應用，其特征在于，視網膜色素上皮細胞培養基用于胚胎視網膜色素上皮細胞快速體外擴增。

4.根據權利要求3所述的一種視網膜色素上皮細胞培養基的應用，其特征在于，視網膜色素上皮細胞培養基用于胚胎視網膜色素上皮細胞快速體外擴增，具體包括以下步驟：

(1)提前1～6小時，用α修飾最小必需培養基包被培養瓶；

(2)快速在36～38℃水浴槽內解凍胚胎RPE細胞，取出凍存管；

(3)將凍存管中的胚胎RPE轉移到錐形試管中，并加入第一RPE細胞培養基，離心；

(4)將步驟(3)錐形試管中的上清吸走，然后再加入第一RPE細胞培養基重懸細胞；

(5)將步驟(1)中培養瓶的培養基吸走，同時加入步驟(4)重懸后的細胞，混勻；

(6)將培養瓶放置于培養箱中培養，第3天將培養瓶中的培養基換成第二RPE細胞培養基；

(7)以后每3天換一次第二RPE細胞培養基，1.5周后即可觀察到具有黑色素的多角形、鑲嵌、呈極性排列的單層細胞。

5.根據權利要求4所述的一種胚胎視網膜色素上皮細胞快速體外擴增的培養基，其特征在于，步驟(1)所述的α修飾最小必需培養基的層粘連蛋白濃度是5～20μg/mL。

6.根據權利要求4所述的一種胚胎視網膜色素上皮細胞快速體外擴增的培養基，其特征在于，步驟(3)中離心的操作條件為常溫，轉速為300～500xg，離心時間為3～5分鐘。

7.根據權利要求4所述的一種胚胎視網膜色素上皮細胞快速體外擴增的培養基，其特征在于，步驟(6)中，培養箱的條件為36～38℃，4.5～5.5％CO₂，90～100％濕度。