[發(fā)明專(zhuān)利]基于高通量基因組測(cè)序的綿羊肉和鴨肉混合肉類(lèi)成分的定量檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410422528.8
• 申請(qǐng)日: 2014-08-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105368921B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾鵬;王磊;劉心;程時(shí)鋒;黃佳穎
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳華大基因科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6869
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6869;G16B30/00
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;崔佳佳

本發(fā)明提供了一種混合肉類(lèi)的定量檢測(cè)方法，具體地，本發(fā)明提供了基于高通量基因組測(cè)序的綿羊肉和鴨肉混合肉類(lèi)成分的定量檢測(cè)方法，包括文庫(kù)構(gòu)建、測(cè)序、數(shù)據(jù)處理、結(jié)果判斷等主要步驟。本發(fā)明提供的方法可用于高通量地定量檢測(cè)多個(gè)綿羊?鴨混合肉類(lèi)樣品，有結(jié)果準(zhǔn)確、檢驗(yàn)快速、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物信息學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了基于高通量基因組測(cè)序的綿羊肉和鴨肉混合肉類(lèi)成分的定量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活水平的提高，人們對(duì)肉類(lèi)的需求日益增加，品種選擇越來(lái)越豐富。近年媒體曝光的假羊肉事件，在社會(huì)上引起了廣泛的關(guān)注，由于綿羊肉脂肪含量比較山羊高，吃起來(lái)更加細(xì)膩可口，不法商販趁機(jī)在綿羊肉中添加價(jià)格低廉的鴨肉，冒充優(yōu)質(zhì)綿羊肉，欺騙廣大消費(fèi)者。由于我國(guó)食品檢測(cè)監(jiān)督條件不完善以及技術(shù)水平和檢測(cè)成本的限制，使得假羊肉事件發(fā)生后，檢測(cè)部門(mén)只能對(duì)樣品摻假進(jìn)行定性分析，而不能給出鴨肉在羊肉中摻雜的比例的定量檢測(cè)，無(wú)法依據(jù)混合的比例程度進(jìn)行進(jìn)一步的執(zhí)法處罰。當(dāng)前，肉類(lèi)混合樣品的定量鑒定技術(shù)上，并沒(méi)有一個(gè)可行的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。基于熒光定量PCR方法理論上雖能準(zhǔn)確鑒定肉樣來(lái)源和混合比例，但是定量PCR技術(shù)重復(fù)性不佳，需要熟練的技術(shù)人員，而且費(fèi)用較高，通量比較低。因此，高效準(zhǔn)確經(jīng)濟(jì)的鑒定肉類(lèi)樣品依然是一個(gè)需要解決的難題。

因此，本領(lǐng)域迫切需要一種基于高通量測(cè)序技術(shù)平臺(tái)開(kāi)發(fā)的對(duì)綿羊肉和鴨肉的混合成分進(jìn)行定量檢測(cè)的新方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一即在于提供一種基于高通量測(cè)序技術(shù)平臺(tái)開(kāi)發(fā)的一種綿羊肉和鴨肉混合成分的物種定量檢測(cè)新方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種測(cè)定混合肉類(lèi)的定量檢測(cè)方法，包含以下步驟：

(a)提供一待測(cè)樣品；

(b)從所述樣品中，提取全基因組DNA；

(c)用上一步驟的全基因組DNA，構(gòu)建PCR-free文庫(kù)；

(d)對(duì)上一步驟的PCR-free文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序，從而獲得所述待測(cè)樣品的全基因組DNA讀序；

(f)將所述讀序與動(dòng)物全基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)，從而獲得匹配的讀序(即比對(duì)上的讀序)；

(g)計(jì)算與所述動(dòng)物物種全基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)序列相匹配的匹配讀序的堿基數(shù)總長(zhǎng)占總讀序堿基數(shù)長(zhǎng)度的百分比，即讀序的比對(duì)率；

(h)基于所述的讀序比對(duì)率，根據(jù)制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算所述待測(cè)樣品中各動(dòng)物源性成分的含量。

在另一優(yōu)選例中，在步驟(h)中，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的比較或通過(guò)擬合公式的計(jì)算，得出所述待測(cè)樣品中動(dòng)物源性成分的含量。

在另一優(yōu)選例中，在步驟(h)中，所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)包括二種或多種不同動(dòng)物的全基因組DNA的“讀序比對(duì)率－質(zhì)量含量百分比”標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

在另一優(yōu)選例中，所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)包括，綿羊和鴨的2種不同動(dòng)物的全基因組DNA的“讀序比對(duì)率－質(zhì)量含量百分比”標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

在另一優(yōu)選例中，所述的樣本含有2種或多種肉類(lèi)。

在另一優(yōu)選例中，所述的肉類(lèi)為鴨和綿羊的混合肉。

在另一優(yōu)選例中，在步驟(h)中，包括與綿羊的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行比較或通過(guò)擬合公式的計(jì)算，得出所述待測(cè)樣品中綿羊肉的質(zhì)量含量。

在另一優(yōu)選例中，在步驟(h)中，包括與鴨的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行比較或通過(guò)擬合公式的計(jì)算，得出所述待測(cè)樣品中鴨肉的質(zhì)量含量。

在另一優(yōu)選例中，所述的綿羊的擬合公式如下式I所示：

Y＝1.1809X (I)