[發明專利]一種脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法

在審

• 申請號: 201410420837.1
• 申請日: 2014-08-25
• 公開（公告）號: CN104231038A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 徐曉云;田秀麗
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明涉及植物提取物技術領域，尤其涉及一種脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法。

背景技術

壺瓶碎米薺是一種富硒能力極強的十字花科植物，壺瓶碎米薺水提噴霧干燥產物的含硒量高達1000mg/kg，其中有機硒含量約占93.30％，做為補硒保健產品的添加成分具有安全性高、吸收好的特點，有很大的應用空間。

目前壺瓶碎米薺水提噴霧干燥產物為深棕褐色，其應用的范圍收到限制，因此，必須該提取物進行脫色。目前脫色的主要方法有活性炭法和雙氧水法，但是我們的研究發現，這兩種方法都會極大影響碎米薺含硒蛋白的生物活性，比如抗氧化活性，我們通過獨有的脫色、純化工藝，獲得了顏色為淺黃色的壺瓶碎米薺含硒蛋白并對其蛋白的性質及抗氧化活性進行了評價，結果顯示脫色及純化技術對其活性沒有不利影響。

發明內容

本發明提供了一種脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法。

本發明采用如下技術方案：

本發明的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法的具體步驟如下：

(1)壺瓶碎米薺提取物的制備：

將干燥的壺瓶碎米薺進行粉碎過篩，然后往壺瓶碎米薺粉末中加入清水浸泡20-40min，料液比為1:20-50，然后開始加熱，在75-84℃下攪拌提取40-80min，繼續升溫在85-95℃下攪拌提取40-80min，然后進行過濾，濾液進行噴霧干燥，得到壺瓶碎米薺提取物粉末；

(2)壺瓶碎米薺提取物的脫色：

將步驟(1)制備的壺瓶碎米薺提取物粉末溶于蒸餾水中，壺瓶碎米薺提取物粉末與蒸餾水的重量體積比為5-15:200g/ml，然后調節壺瓶碎米薺提取物溶液pH值至壺瓶碎米薺蛋白的等電點，靜置10-15h，然后在2-6℃，5000-7000r/min下離心8-12min，收集沉淀并真空冰凍干燥，得到脫色后的壺瓶碎米薺粗蛋白；

(3)壺瓶碎米薺粗蛋白的分級純化：

將步驟(2)獲得的脫色后的壺瓶碎米薺粗蛋白使用Sephadex?G-100凝膠柱層析和DEAE-FF陰離子交換柱層析，經分級純化得到本發明的壺瓶碎米薺純化含硒蛋白。

步驟(1)中，干燥的壺瓶碎米薺進行粉碎過100目篩。

步驟(1)中，優選往壺瓶碎米薺粉末中加入清水浸泡30min，料液比為1:30。

步驟(1)中，優選在80℃下攪拌提取60min，繼續升溫在90℃下攪拌提取60min。

步驟(1)中，優選進行120目過濾，濾液進行噴霧干燥，噴霧干燥的參數為：進風溫度185℃，流量25mL/min。

步驟(2)中，優選壺瓶碎米薺提取物粉末與蒸餾水的重量體積比為10:200g/ml。

步驟(2)中，用硫酸銨調節壺瓶碎米薺提取物溶液pH值至壺瓶碎米薺蛋白的等電點(pH＝5.3)，靜置12h，然后在4℃，6000r/min下離心10min，收集沉淀并真空冰凍干燥，得到脫色后的壺瓶碎米薺粗蛋白。

步驟(3)中，Sephadex?G-100分級條件為：26mm×500mm層析柱，用緩沖液洗脫，上樣濃度200mg/mL，上樣體積2mL，泵流速5r/min，洗脫的溶液用部分收集器分步收集，每管收集2.0mL，將同一組分收集合并，進行透析72h后，濃縮冷凍干燥，將得到的蛋白含量、硒含量高的組分作為進一步純化樣品上纖維素DEAE-FF柱。

步驟(3)中，DEAE-FF分級條件為：以0-1mol/L?NaCl梯度洗脫，上樣濃度10mg/mL，上樣體積2mL，泵流速3.8r/min，每管收集1.5mL，將同一組分收集合并，得到蛋白分離組分，透析72h，濃縮冷凍干燥，得純化含硒蛋白粉末，含硒純化蛋白硒含量、蛋白含量高的即為本發明的壺瓶碎米薺純化含硒蛋白。

本發明的積極效果如下：

(1)通過調節壺瓶碎米薺提取物溶液的pH值獲得色澤明顯變淺的壺瓶碎米薺粗蛋白粉。

(2)通過柱層析的方法可以獲得純化硒含量較高的純化含硒蛋白。

(3)脫色后的壺瓶碎米薺粗蛋白粉和純化含硒蛋白仍然具有較好的自由基清除活性，表明經過處理的壺瓶碎米薺能夠提高產品在同類產品中的競爭力，有利于產品的開發應用。

附圖說明

圖1為純化含硒蛋白的變形和非變性電泳圖譜。

圖2為純化含硒蛋白圓二色性光譜譜圖。

具體實施方式

下面的實施例是對本發明的進一步詳細描述。