[發明專利]一種脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法

在審

• 申請號: 201410420837.1
• 申請日: 2014-08-25
• 公開（公告）號: CN104231038A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 徐曉云;田秀麗
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：所述方法的具體步驟如下：

(1)壺瓶碎米薺提取物的制備：

將干燥的壺瓶碎米薺進行粉碎過篩，然后往壺瓶碎米薺粉末中加入清水浸泡20-40min，料液比為1:20-50，然后開始加熱，在75-84℃下攪拌提取40-80min，繼續升溫在85-95℃下攪拌提取40-80min，然后進行過濾，濾液進行噴霧干燥，得到壺瓶碎米薺提取物粉末；

(2)壺瓶碎米薺提取物的脫色：

將步驟(1)制備的壺瓶碎米薺提取物粉末溶于蒸餾水中，壺瓶碎米薺提取物粉末與蒸餾水的重量體積比為5-15:200g/ml，然后調節壺瓶碎米薺提取物溶液pH值至壺瓶碎米薺蛋白的等電點，靜置10-15h，然后在2-6℃，5000-7000r/min下離心8-12min，收集沉淀并真空冰凍干燥，得到脫色后的壺瓶碎米薺粗蛋白；

(3)壺瓶碎米薺粗蛋白的分級純化：

將步驟(2)獲得的脫色后的壺瓶碎米薺粗蛋白使用Sephadex?G-100凝膠柱層析和DEAE-FF陰離子交換柱層析，經分級純化得到本發明的壺瓶碎米薺純化含硒蛋白。

2.如權利要求1所述的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：步驟(1)中，干燥的壺瓶碎米薺進行粉碎過100目篩。

3.如權利要求1所述的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：步驟(1)中，往壺瓶碎米薺粉末中加入清水浸泡30min，料液比為1:30。

4.如權利要求1所述的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：步驟(1)中，在80℃下攪拌提取60min，繼續升溫在90℃下攪拌提取60min。

5.如權利要求1所述的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：步驟(1)中，進行120目過濾，濾液進行噴霧干燥，噴霧干燥的參數為：進風溫度185℃，流量25mL/min。

6.如權利要求1所述的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：步驟(2)中，壺瓶碎米薺提取物粉末與蒸餾水的重量體積比為10:200g/ml。

7.如權利要求1所述的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：步驟(2)中，用硫酸銨調節壺瓶碎米薺提取物溶液pH值至壺瓶碎米薺蛋白的等電點，靜置12h，然后在4℃，6000r/min下離心10min，收集沉淀并真空冰凍干燥，得到脫色后的壺瓶碎米薺粗蛋白。

8.如權利要求1所述的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：步驟(3)中，Sephadex?G-100分級條件為：26mm×500mm層析柱，用緩沖液洗脫，上樣濃度200mg/mL，上樣體積2mL，泵流速5r/min，洗脫的溶液用部分收集器分步收集，每管收集2.0mL，將同一組分收集合并，進行透析72h后，濃縮冷凍干燥，將得到的蛋白含量、硒含量高的組分作為進一步純化樣品上纖維素DEAE-FF柱。

9.如權利要求1所述的脫色壺瓶碎米薺含硒蛋白的提取、純化方法，其特征在于：步驟(3)中，DEAE-FF分級條件為：以0-1mol/L?NaCl梯度洗脫，上樣濃度10mg/mL，上樣體積2mL，泵流速3.8r/min，每管收集1.5mL，將同一組分收集合并，得到蛋白分離組分，透析72h，濃縮冷凍干燥，得純化含硒蛋白粉末，含硒純化蛋白硒含量、蛋白含量高的即為本發明的壺瓶碎米薺純化含硒蛋白。