[發(fā)明專利]一種豬圓環(huán)病毒的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410420796.6 | 申請(qǐng)日： | 2014-08-25 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104250636A | 公開（公告）日： | 2014-12-31 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張?jiān)S科;孫進(jìn)忠;王延輝;王瑩;田克恭 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 普萊柯生物工程股份有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N7/00 | 分類號(hào)： | C12N7/00;C12N1/20;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/35;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京華夏正合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11017 | 代理人： | 韓登營(yíng) |
| 地址： | 471000 *** | 國(guó)省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 種豬 圓環(huán) 病毒 培養(yǎng) 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種豬圓環(huán)病毒的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法包括：(1)培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，(2)將豬圓環(huán)病毒、豬肺炎支原體分別接種于培養(yǎng)好的動(dòng)物細(xì)胞上，以同時(shí)培養(yǎng)豬圓環(huán)病毒和豬肺炎支原體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法中動(dòng)物細(xì)胞為豬腎傳代細(xì)胞系、非洲綠猴腎細(xì)胞系、猴胚胎腎上皮細(xì)胞系和豬睪丸細(xì)胞系中任一細(xì)胞系中的細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法中動(dòng)物細(xì)胞為PK15細(xì)胞、PKK細(xì)胞、Vero細(xì)胞、Marc145細(xì)胞和ST細(xì)胞中的任一種，優(yōu)選為PK15細(xì)胞或PKK細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法中動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)方式為單層貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)或固定化培養(yǎng)，優(yōu)選為單層貼壁培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(1)中培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞用細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，所述細(xì)胞培養(yǎng)液為含5％(V/V)胎牛血清的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基為MEM培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基、RPMR1640培養(yǎng)基和199培養(yǎng)基中的任一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(2)中將豬圓環(huán)病毒、豬肺炎支原體分別同時(shí)接種于培養(yǎng)好的動(dòng)物細(xì)胞上；優(yōu)選地，所述步驟(2)中豬圓環(huán)病毒、豬肺炎支原體分別按0.01-0.05MOI、1％-10％(V/V)同時(shí)接種于培養(yǎng)好的動(dòng)物細(xì)胞上。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(2)中豬圓環(huán)病毒為豬圓環(huán)病毒2型全病毒毒株，豬肺炎支原體為豬肺炎支原體全菌菌株；優(yōu)選地，所述步驟(2)中豬圓環(huán)病毒為SH株、SD株、D株、WH株、LG株、ZJ/C株、ZJ/H株、DBN-SX07株和V201312株中的任一毒株，豬肺炎支原體為HN0613株、P株、J株、168株、P-5722-3株、BQ14株、NJ株、HDZK-Mhp57株、AN306株、DJ-166株和NM04/41259株中的任一菌株。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(2)中培養(yǎng)豬圓環(huán)病毒2型和豬肺炎支原體用細(xì)胞維持液培養(yǎng)，所述細(xì)胞維持液為含4％(V/V)犢牛血清和2mmol/l?D-氨基葡萄糖鹽酸的培養(yǎng)基，或含1.5％(V/V)胎牛血清的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基為MEM培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基、RPMR1640培養(yǎng)基和199培養(yǎng)基中的任一種。
9.一種豬肺炎支原體的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法包括：(1)培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，(2)將豬肺炎支原體接種于動(dòng)物細(xì)胞上，以培養(yǎng)豬肺炎支原體。
10.一種疫苗組合物，所述疫苗組合物包括免疫量的權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述培養(yǎng)方法制備的豬圓環(huán)病毒抗原、免疫量的豬肺炎支原體抗原和/或獸醫(yī)學(xué)上可接受的佐劑。
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