[發明專利]一種早熟梨莖段的組織培養方法及培養基

有效

• 申請號: 201410420032.7
• 申請日: 2014-08-22
• 公開（公告）號: CN104126511A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 王宏;藺經;常有宏;馬娜;甘慧芳
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

技術領域

本發明屬于植物細胞分子生物學領域，具體涉及梨莖段的組織培養方法及培養基。

背景技術

蘇翠1號是優質早熟砂梨，親本為華酥×翠冠，2003年雜交，2004年培養雜交苗，2011年通過江蘇省農作物品種審定委員會品種認可(蘇鑒果201107)。果肉白色，肉質細脆，石細胞極少或無，汁多味甜、風味好、品質佳?；ㄑ恳仔纬?，連續結果能力強，坐果率高，果實成熟期為7月初。

蘇翠2號也屬于早熟砂梨，親本為西子綠×翠冠，2003年雜交，2004年培養雜交苗，2011年通過江蘇省品種審定。果實倒卵圓形，果皮黃綠色，無銹，果肉白色，肉質細脆，石細胞極少或無，花芽易形成，連續結果能力強，坐果率高，果實成熟期為7月中旬。

蘇翠1號和蘇翠2號采用常規的扦插方法進行繁殖時，繁殖系數低、高度雜合；采用常規的組培方法進行繁殖時，試管苗增殖系數低，平均生根率、平均根數較低，根長較短。

發明內容

本發明的目的是提供一種梨莖段的組織培養方法，該方法顯著提高了試管苗的增殖率、增殖系數、生根率、平均根長和平均根數。

本發明的另一目的是提供用于梨莖段組織培養的培養基。

本發明的目的采用如下技術方案實現。

一種早熟梨莖段的組織培養方法，包括如下步驟：將外植體采用初始接種培養基進行誘導分化培養，得到初代組培苗；將所述初代組培苗用增殖培養基進行增殖培養，然后切取新稍轉接入壯苗培養基進行繼代培養，再依次轉入生根培養基A和生根培養基B進行生根培養；

所述初始接種培養基是在1/2MS或AS基本培養基中添加6-BA、NAA和GA₃后得到的培養基，所述6-BA的終濃度為0.5-1.0mg/L，所述NAA的終濃度為0.05-0.5mg/L，所述GA₃的終濃度為0.2-3mg/L，所述初始接種培養基的pH為5.5-5.8；

所述增殖培養基是在MS培養基中添加6-BA、NAA和GA₃后得到的培養基，所述6-BA的終濃度為0.5～1.0mg/L，所述NAA的終濃度為0.1～0.2mg/L，所述GA₃的終濃度為0.5-3mg/L，所述增殖培養基的pH為5.5-5.8；

所述壯苗培養基是1/3MS培養基或1/4QL培養基，所述壯苗培養基的pH為5.5-5.8；

所述生根培養基A是在1/4QL培養基中添加IAA、6-BA和NAA后得到的培養基，所述IAA的終濃度為0.4-0.6mg/L，所述6-BA的終濃度為0.8-1.2mg/L，所述NAA的終濃度為0.05-0.15mg/L,所述的生根培養基的pH為5.5-5.8；

所述生根培養基B是1/4QL培養基。

在本發明中，所述初始接種培養基、增殖培養基、壯苗培養基、生根培養基A和生根培養基B中均添加有蔗糖和瓊脂，所述蔗糖的終濃度為20～30g/L，所述瓊脂的終濃度為5-7g/L。

在本發明中，所述初始接種培養基中的培養條件為：培養溫度22～25℃，每天光照15-16h、黑暗8-9h，光照強度為1500-2000lx，每25-32d更換一次初始接種培養基。

在本發明中，所述增殖培養基中的培養條件為：培養溫度22～25℃，每天光照15-17h、黑暗7-9h，光照強度為1500-2000lx，培養時間為25-32d。

在本發明中，所述壯苗培養基中的培養條件為：培養溫度22～25℃，每天光照15-17h、黑暗7-9h，光照強度為1500-2000lx，每13-16天繼代一次，繼代次數為2-3次。

在本發明中，所述生根培養基A中的培養條件為：培養溫度24～26℃，黑暗培養7-12天。

在本發明中，所述生根培養基B中的培養條件為：培養溫度22～25℃，每天光照15-16h、黑暗8-9h，光照強度為1500-2000lx，培養時間為50-60天。

在本發明中，所述外植體為成齡母株莖段；優選為當年生帶芽莖段。

在本發明中，所述外植體在誘導分化培養前進行如下處理：用羧芐青霉素水溶液浸泡所述外植體，然后采用含有愛力克^TMA、B和吐溫20的溶液對所述外植體進行消毒。

本發明還要求保護用于早熟梨莖段組織培養的培養基，由如下培養基中的全部或部分組成：

(a)初始接種培養基；