[發(fā)明專利]一種早熟梨莖段的組織培養(yǎng)方法及培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410420032.7
• 申請(qǐng)日: 2014-08-22
• 公開（公告）號(hào): CN104126511A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王宏;藺經(jīng);常有宏;馬娜;甘慧芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京匯盛專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物細(xì)胞分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及梨莖段的組織培養(yǎng)方法及培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

蘇翠1號(hào)是優(yōu)質(zhì)早熟砂梨，親本為華酥×翠冠，2003年雜交，2004年培養(yǎng)雜交苗，2011年通過江蘇省農(nóng)作物品種審定委員會(huì)品種認(rèn)可(蘇鑒果201107)。果肉白色，肉質(zhì)細(xì)脆，石細(xì)胞極少或無，汁多味甜、風(fēng)味好、品質(zhì)佳。花芽易形成，連續(xù)結(jié)果能力強(qiáng)，坐果率高，果實(shí)成熟期為7月初。

蘇翠2號(hào)也屬于早熟砂梨，親本為西子綠×翠冠，2003年雜交，2004年培養(yǎng)雜交苗，2011年通過江蘇省品種審定。果實(shí)倒卵圓形，果皮黃綠色，無銹，果肉白色，肉質(zhì)細(xì)脆，石細(xì)胞極少或無，花芽易形成，連續(xù)結(jié)果能力強(qiáng)，坐果率高，果實(shí)成熟期為7月中旬。

蘇翠1號(hào)和蘇翠2號(hào)采用常規(guī)的扦插方法進(jìn)行繁殖時(shí)，繁殖系數(shù)低、高度雜合；采用常規(guī)的組培方法進(jìn)行繁殖時(shí)，試管苗增殖系數(shù)低，平均生根率、平均根數(shù)較低，根長(zhǎng)較短。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種梨莖段的組織培養(yǎng)方法，該方法顯著提高了試管苗的增殖率、增殖系數(shù)、生根率、平均根長(zhǎng)和平均根數(shù)。

本發(fā)明的另一目的是提供用于梨莖段組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。

一種早熟梨莖段的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟：將外植體采用初始接種培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，得到初代組培苗；將所述初代組培苗用增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，然后切取新稍轉(zhuǎn)接入壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，再依次轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基A和生根培養(yǎng)基B進(jìn)行生根培養(yǎng)；

所述初始接種培養(yǎng)基是在1/2MS或AS基本培養(yǎng)基中添加6-BA、NAA和GA₃后得到的培養(yǎng)基，所述6-BA的終濃度為0.5-1.0mg/L，所述NAA的終濃度為0.05-0.5mg/L，所述GA₃的終濃度為0.2-3mg/L，所述初始接種培養(yǎng)基的pH為5.5-5.8；

所述增殖培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中添加6-BA、NAA和GA₃后得到的培養(yǎng)基，所述6-BA的終濃度為0.5～1.0mg/L，所述NAA的終濃度為0.1～0.2mg/L，所述GA₃的終濃度為0.5-3mg/L，所述增殖培養(yǎng)基的pH為5.5-5.8；

所述壯苗培養(yǎng)基是1/3MS培養(yǎng)基或1/4QL培養(yǎng)基，所述壯苗培養(yǎng)基的pH為5.5-5.8；

所述生根培養(yǎng)基A是在1/4QL培養(yǎng)基中添加IAA、6-BA和NAA后得到的培養(yǎng)基，所述IAA的終濃度為0.4-0.6mg/L，所述6-BA的終濃度為0.8-1.2mg/L，所述NAA的終濃度為0.05-0.15mg/L,所述的生根培養(yǎng)基的pH為5.5-5.8；

所述生根培養(yǎng)基B是1/4QL培養(yǎng)基。

在本發(fā)明中，所述初始接種培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基A和生根培養(yǎng)基B中均添加有蔗糖和瓊脂，所述蔗糖的終濃度為20～30g/L，所述瓊脂的終濃度為5-7g/L。

在本發(fā)明中，所述初始接種培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度22～25℃，每天光照15-16h、黑暗8-9h，光照強(qiáng)度為1500-2000lx，每25-32d更換一次初始接種培養(yǎng)基。

在本發(fā)明中，所述增殖培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度22～25℃，每天光照15-17h、黑暗7-9h，光照強(qiáng)度為1500-2000lx，培養(yǎng)時(shí)間為25-32d。

在本發(fā)明中，所述壯苗培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度22～25℃，每天光照15-17h、黑暗7-9h，光照強(qiáng)度為1500-2000lx，每13-16天繼代一次，繼代次數(shù)為2-3次。

在本發(fā)明中，所述生根培養(yǎng)基A中的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度24～26℃，黑暗培養(yǎng)7-12天。

在本發(fā)明中，所述生根培養(yǎng)基B中的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度22～25℃，每天光照15-16h、黑暗8-9h，光照強(qiáng)度為1500-2000lx，培養(yǎng)時(shí)間為50-60天。

在本發(fā)明中，所述外植體為成齡母株莖段；優(yōu)選為當(dāng)年生帶芽莖段。

在本發(fā)明中，所述外植體在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)前進(jìn)行如下處理：用羧芐青霉素水溶液浸泡所述外植體，然后采用含有愛力克^TMA、B和吐溫20的溶液對(duì)所述外植體進(jìn)行消毒。

本發(fā)明還要求保護(hù)用于早熟梨莖段組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，由如下培養(yǎng)基中的全部或部分組成：

(a)初始接種培養(yǎng)基；