[發(fā)明專(zhuān)利]一種油基鉆屑降解菌及其制備和應(yīng)用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410419910.3
• 申請(qǐng)日: 2014-08-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104312936B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 單海霞;何煥杰;王中華;馬金;王芹;詹適新
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)石油化工集團(tuán)公司;中石化中原石油工程有限公司鉆井工程技術(shù)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;B09C1/10;A62D3/02;C12R1/385;C12R1/01
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛(ài)周

1.一種油基鉆屑降解菌，由復(fù)合菌群構(gòu)建組成，其特征是：該油基鉆屑降解菌含有拉丁文學(xué)名為 Pseudomonas Aeruginosa的銅綠假單胞菌、拉丁文學(xué)名為Kocuria kristinae的克氏微球菌和拉丁文學(xué)名為Acinetobacter Calcoaceticus的乙酸鈣不動(dòng)桿菌；

所述油基鉆屑降解菌由包括如下步驟的方法制備得到：

（1）在井場(chǎng)取石油污染土壤，對(duì)土壤中的細(xì)菌在LB培養(yǎng)基、中性環(huán)境、溫度為30℃～40℃條件下進(jìn)行富集培養(yǎng)，將富集培養(yǎng)后的細(xì)菌經(jīng)分離、純化和篩選，獲得以下3株降解單菌：銅綠假單胞菌，拉丁文學(xué)名Pseudomonas Aeruginosa；克氏微球菌，拉丁文學(xué)名Kocuriakristinae；乙酸鈣不動(dòng)桿菌，拉丁文學(xué)名Acinetobacter Calcoaceticus；

（2）將步驟（1）所得3株降解單菌按照銅綠假單胞菌：克氏微球菌：乙酸鈣不動(dòng)桿菌1：（0.9～1.1）：（0.9～1.1）的體積比例進(jìn)行混合，得到混合菌液；

（3）將步驟（2）的混合菌液在工業(yè)培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、分離、干燥后，得到油基鉆屑降解菌，命名為BSG。

2.一種油基鉆屑降解菌的制備方法，其特征是，包括如下步驟：

（1）在井場(chǎng)取石油污染土壤，對(duì)土壤中的細(xì)菌在LB培養(yǎng)基、中性環(huán)境、溫度為30℃～40℃條件下進(jìn)行富集培養(yǎng)，將富集培養(yǎng)后的細(xì)菌經(jīng)分離、純化和篩選，獲得以下3株降解單菌：銅綠假單胞菌，拉丁文學(xué)名Pseudomonas Aeruginosa；克氏微球菌，拉丁文學(xué)名Kocuriakristinae；乙酸鈣不動(dòng)桿菌，拉丁文學(xué)名Acinetobacter Calcoaceticus；

（2）將步驟（1）所得3株降解單菌按照銅綠假單胞菌：克氏微球菌：乙酸鈣不動(dòng)桿菌1：（0.9～1.1）：（0.9～1.1）的體積比例進(jìn)行混合，得到混合菌液；

（3）將步驟（2）的混合菌液在工業(yè)培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、分離、干燥后，得到油基鉆屑降解菌，命名為BSG。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的油基鉆屑降解菌的制備方法，其特征是：所述步驟（3）中的工業(yè)培養(yǎng)基，按質(zhì)量/體積比計(jì)，由1%～2%的蛋白胨、0.8%～1.2%的葡萄糖、 1.5%～2%的酵母膏、0.1%～0.15%的氯化鈉、0.5%～0.7%的磷酸氫二鉀、1%～2%的氯化鎂、水組成。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的油基鉆屑降解菌的制備方法，其特征是：所述的步驟（3）中的發(fā)酵培養(yǎng)的條件為：發(fā)酵溫度33～37℃，接種量10%～20%v/v，攪拌速度100～150rpm，發(fā)酵時(shí)間24～48h，發(fā)酵過(guò)程中向培養(yǎng)基中通入空氣，每分鐘通入空氣的氣液體積比為1～1.5。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的油基鉆屑降解菌的制備方法，所述的步驟（3）中油基鉆屑降解菌的菌活數(shù)均為10⁹～10¹¹個(gè)/g。

6.如權(quán)利要求1所述的油基鉆屑降解菌的應(yīng)用，其特征是：收集被處理的油基鉆屑，調(diào)節(jié)pH值至6.5～8.5，控制濕度為20～30%；向油基鉆屑中投加質(zhì)量比0.01～0.02%的油基鉆屑降解菌BSG，再加入無(wú)機(jī)銨鹽、無(wú)機(jī)磷鹽，使油基鉆屑中的C：N：P的摩爾比為100：5～10：0.5～5，其中，C為所處理的油基鉆屑中含有的石油烴；定期翻動(dòng)被處理的油基鉆屑，并補(bǔ)加氮磷營(yíng)養(yǎng)和油基鉆屑降解菌BSG，測(cè)定含油量，直至油基鉆屑中的含油量降至0.3%以下。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的油基鉆屑降解菌的應(yīng)用，其特征是：所述的無(wú)機(jī)銨鹽為硫酸銨、硝酸銨或尿素。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的油基鉆屑降解菌的應(yīng)用，其特征是：所述的無(wú)機(jī)磷鹽為磷酸氫二鉀或磷酸二氫鉀。