[發明專利]一種新型凍干水痘減毒活疫苗的生產方法

在審

• 申請號: 201410419586.5
• 申請日: 2014-08-25
• 公開（公告）號: CN104188923A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 高輝
• 申請（專利權）人: 北京合康源生物科技有限公司
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K39/25;A61K47/26;A61K47/42;A61P31/22
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種新型凍干水痘減毒活疫苗的生產方法。

背景技術

水痘是由水痘-帶狀皰疹病毒引起的急性呼吸道傳染病，具有高度傳染性，常見于兒童，發熱伴全身瘙癢性皮疹、斑疹、丘疹和水泡疹是其主要臨床特征。由于兒童期水痘發病絕大多數癥狀輕微，過去常不被人們所重視，但患水痘后處理不當，會并發肺炎、腦炎等嚴重疾病，甚至死亡，且感染后潛伏在體內，激活后又可發生帶狀皰疹。我國兒童水痘的發病和危害日益凸顯。接種水痘疫苗是目前控制水痘感染與流行的有效手段，如何進一步增加水痘疫苗供應量，提高水痘疫苗的質量是公共衛生領域不可忽視的重要問題之一。

反應器細胞培養技術是以反應器懸浮培養動物細胞生產或研制生物制品的一種通用的平臺技術，可廣泛地用于生產單抗、人用疫苗或者獸用疫苗等生物制品。國內人用和獸用疫苗生產企業有100多家，但只有5家左右企業是采用反應器細胞培養技術生產疫苗，其他超過95％的疫苗企業生產仍然采用批量小、效率低、勞動強度大、占用場地多的轉瓶機，細胞培養和病毒生產效率低。美國FDA和我國SFDA都鼓勵和要求各生物公司建立起規模化、自動化的疫苗生產技術平臺，從而提高和保證疫苗質量。反應器細胞培養技術是疫苗生產的重要的發展趨勢。

目前使用的疫苗凍干保護劑多數是以明膠、蔗糖為主要成分。明膠和明膠衍生物能直接引起被接種者的變態反應，另外明膠也是細菌內毒素的主要來源，可導致人體產生發熱反應。為了減輕或避免疫苗使用過程中出現的不良反應，凍干保護劑中去除明膠和血液源性白蛋白的需求變得更加迫切。

目前，人血清白蛋白在疫苗領域被廣泛應用于細胞培養和凍干保護劑。常見的人血清白蛋白大多是從人的血漿中提取，這樣的生產方式不僅受到血漿供應的限制，而且還可能含有危險的傳染病病原體，如肝炎病毒、HIV病毒等，這使得人們對于使用血漿中提取的人血清白蛋白存在巨大的擔憂。隨著現代DNA重組和合成技術的發展，人們開始利用DNA重組技術生產人血清白蛋白替代傳統的生產方式。國際上以重組人血清白蛋白替代血源性產品的應用已成為趨勢，目前國內已有企業利用水稻胚乳表達技術，研發出重組人清血白蛋白產品，并成功實現重組人血清白蛋白規模化和產業化，完全擺脫了相關制約，具有純度更高、無動物組分、安全、高效、綠色環保、廉價、無限量供應等優勢。

發明內容

針對上述問題，本發明目的在于，公開一種新型凍干水痘減毒活疫苗的生產方法，所述方法利用生物反應器大規模培養水痘疫苗，不僅提高了疫苗的產量，而且收獲后使用一種含山梨醇和重組人血清白蛋白的凍干保護劑，生產凍干水痘減毒活疫苗，此保護劑去除了動物源性成分，使疫苗內毒素含量明顯降低，極大地降低了疫苗對人體的刺激性及危害性。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種新型凍干水痘減毒活疫苗的生產方法，所述生產方法包括以下步驟：

1)人二倍體細胞株的復蘇和傳代培養；

2)人二倍體細胞使用微載體在生物反應器中培養；

3)接種水痘病毒OKa株，病毒增殖，待細胞病變達到75％以上時準備收獲水痘病毒培養液，得到初步培養液；

4)向所述初步培養液中加入凍干保護劑，收獲水痘病毒培養液，經純化后配制成水痘疫苗原液；

5)將上述水痘疫苗原液分裝，凍干，即得到所述的新型凍干水痘減毒活疫苗。

進一步的，所述凍干保護劑的原料包括山梨醇、重組人血清白蛋白、蔗糖、右旋糖酐、海藻糖、精氨酸、谷氨酸鈉和尿素，所述各個原料的重量份數比為：

進一步的，所述的重組人血清白蛋白為水稻胚乳中或非動物源細胞中表達的白蛋白。

進一步的，所述人二倍體細胞株為WI-38，MRC-5，2BS，KMB-17中的任一種。

進一步的，所述微載體為Cytodex系列微載體、Cytopore系列微載體、Cytoline系列微載體或Fibra-Cel?Disks微載體中的任一種。

進一步的，所述生物反應器為攪拌式生物反應器或填充床生物反應器。

本發明與現有技術相比的有益效果為：

1、本發明所述的方法利用反應器大規模培養技術，不但降低了生產成本，解決了靜止培養工藝中產量低、生產占地大、勞動強度大的弊端，而且提高了疫苗的產量，增加了病毒滴度的穩定性；