[發(fā)明專利]一種鏈霉菌菌株及由它制備的具抗植物病原真菌的化合物及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410418250.7
• 申請日: 2014-08-22
• 公開（公告）號: CN104212742A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙沛基;周曉雪;李靖;楊銀河;曾英
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/10;C12P17/12;C07D211/88;A01N37/42;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 昆明協(xié)立知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53108
• 代理人: 馬曉青

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種鏈霉菌(Streptomyces?sp.)FTY2菌株，及由其制備的具有抑制植物病原真菌的化合物及其制備方法和應(yīng)用。?

背景技術(shù)：

農(nóng)作物病蟲草鼠害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的重要生物災(zāi)害，是制約農(nóng)業(yè)生產(chǎn)高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效和持續(xù)發(fā)展的重要因素之一。我國農(nóng)作物病蟲草鼠等生物災(zāi)害種類多，糧食作物的主要病蟲害有近200種(胡伯海.2002)。眾多病蟲害發(fā)生重、范圍廣，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大損失，約為農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的20％～25％(王長燕等，2006)，因而嚴(yán)重影響我國的糧食生產(chǎn)和品質(zhì)安全。植物保護(hù)作為防治農(nóng)業(yè)病蟲害的重要措施，對促進(jìn)我國糧食生產(chǎn)安全和保障糧食安全的可持續(xù)發(fā)展有著十分重要的意義。因此，研究開發(fā)高效低毒的生物病蟲害制劑已成為農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要問題。現(xiàn)有技術(shù)中未見有一種鏈霉菌(Streptomyces?sp.)FTY2菌株制備兩個環(huán)己酰亞胺化合物(cycloheximide)以及它們抗植物病原真菌活性的報道。?

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于提供一類來源于榧樹的內(nèi)生鏈霉菌的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)FTY2菌株，由其制備的具有抑制植物病原真菌的化合物及其制備方法和應(yīng)用。該化合物具有抗病原真菌(小麥全蝕病菌(Gaeumannomyces?graminis)、棉紅腐病菌(Fusarinum?moniliforme)、三七絲核病菌(Verticillium?cinnabarium)以及水稻稻瘟病菌(Phyricularia?oryzae))的活性。?

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：?

一種分離自榧樹的內(nèi)生鏈霉菌(Streptomyces?sp.)菌株，編號為FTY2，由16S?rDNA鑒定菌株，保藏號為CGMCC?No.9133。?

如所述的鏈霉菌FTY2菌株，其DNA由下述方法制備而得：?

(1)將FTY2接種于液體淀粉培養(yǎng)基中，25℃，200rpm培養(yǎng)14天，過濾收集菌絲體；?

(2)選取適量菌絲體放入1.5mL離心管(EP管)中，同時在離心管中加入少量的石英砂和少量的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)；?

(3)在離心管(內(nèi)有研磨好的材料粉末)中加入750μL?65℃水浴預(yù)熱的4×CTAB提取液，充分研磨后，放入65℃水浴鍋中溫浴2-4h，期間每30min搖勻一次；?

(4)將溫浴的材料取出置于室溫下，待冷卻至室溫后加入等體積(750μL)的苯酚-氯仿-異戊醇混合液(25:24:1)，搖勻3～5min，12000rpm室溫離心10min；?

(5)將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5mL的離心管中，再加入等體積的氯仿-異戊醇(500-550μL)混合液(若顏色較深可前兩次使用苯酚-氯仿-異戊醇混合液，最后一次使用氯仿-異戊醇)，搖勻3～5min，12000rpm，室溫離心10min；(?

(6)將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5mL的離心管中，加入2/3體積(約350μL)的-20℃預(yù)冷的異丙醇(凝固點(diǎn)低，沉降DNA)，沉降DNA，充分混勻后(一定要充分搖勻，否則會冰凍)，于-20℃冰箱中靜置保存2h；?

(7)將冷凍保存的離心管取出后置于室溫中，待溫度至室溫后12000rpm室溫離心15min。可見底部沉降DNA；?

(8)棄去上清液，用500μL的70％的乙醇和無水乙醇各沖洗1-2次，每次12000rpm室溫離心1min后棄上清液(直接倒掉上清液即可，注意不要將DNA倒掉，倒的過程中可輕輕旋轉(zhuǎn)使DNA貼在壁上)，然后將離心管置于37℃恒溫箱中約20～30min使乙醇充分揮發(fā)(也可以開蓋使其自然干燥)，干燥后加入滅菌的蒸餾水；?

(9)置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?

如所述的鏈霉菌FTY2菌株，其來源于榧樹的內(nèi)生鏈霉菌。?