[發(fā)明專利]一種鏈霉菌菌株及由它制備的具抗植物病原真菌的化合物及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410418250.7
• 申請日: 2014-08-22
• 公開（公告）號: CN104212742A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙沛基;周曉雪;李靖;楊銀河;曾英
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/10;C12P17/12;C07D211/88;A01N37/42;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 昆明協(xié)立知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53108
• 代理人: 馬曉青

1.一種分離自榧樹的內(nèi)生鏈霉菌Streptomyces?sp.菌株，編號為FTY2，由16S?rDNA鑒定菌株，保藏號為CGMCC?No.9133。

2.如權(quán)利要求1所述的鏈霉菌FTY2菌株，其特征在于其DNA由下述方法制備而得：

(1)將FTY2接種于液體淀粉培養(yǎng)基中，25℃，200rpm培養(yǎng)14天，過濾收集菌絲體；

(2)選取適量菌絲體放入1.5mL離心管即EP管中，同時(shí)在離心管中加入少量的石英砂和少量的PVP聚乙烯吡咯烷酮；

(3)在內(nèi)有研磨好的材料粉末的離心管中加入750μL?65℃水浴預(yù)熱的4×CTAB提取液，充分研磨后，放入65℃水浴鍋中溫浴2-4h，期間每30min搖勻一次；

(4)將溫浴的材料取出置于室溫下，待冷卻至室溫后加入等體積750μL的25:24:1的苯酚-氯仿-異戊醇混合液，搖勻3～5min，12000rpm室溫離心10min；

(5)將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5mL的離心管中，再加入等體積500-550μL的氯仿-異戊醇混合液，當(dāng)顏色較深時(shí)，前兩次使用苯酚-氯仿-異戊醇混合液，最后一次使用氯仿-異戊醇，搖勻3～5min，12000rpm，室溫離心10min；

(6)將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5mL的離心管中，加入2/3體積的-20℃預(yù)冷的異丙醇，沉降DNA，充分混勻后，于-20℃冰箱中靜置保存2h；

(7)將冷凍保存的離心管取出后置于室溫中，待溫度至室溫后12000rpm室溫離心15min，底部沉降DNA；

(8)棄去上清液，用500μL的70％的乙醇和無水乙醇各沖洗1-2次，每次12000rpm室溫離心1min后棄上清液，直接倒掉上清液，倒的過程中輕輕旋轉(zhuǎn)使DNA貼在壁上，然后將離心管置于37℃恒溫箱中20～30min使乙醇充分揮發(fā)或開蓋使其自然干燥，干燥后加入滅菌的蒸餾水；

(9)置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

3.如權(quán)利要求1所述的鏈霉菌FTY2菌株，其特征在于其來源于榧樹的內(nèi)生鏈霉菌。

4.權(quán)利要求1所述的鏈霉菌FTY2菌株的制備方法，取云南榧Torreya?yunnanensis的新鮮枝條置于冰盒保存，帶回實(shí)驗(yàn)室后，將新鮮枝葉用自來水沖洗15-20min，晾干后置于超凈工作臺(tái)上進(jìn)行表面消毒，先用75％乙醇浸泡1-2min，用無菌水涮洗3次，接著用15％的NaClO浸泡15-20min，用無菌水涮洗3次，取消毒后的3g葉片置于無菌研缽中加5mL無菌水研磨呈勻漿狀，用三角涂布棒將200μL研磨液均勻涂布于含有50mg/L的重鉻酸鉀的高氏1號固體培養(yǎng)基上，所述培養(yǎng)基組成為：可溶性淀粉20g/L，KNO₃1g/L，K₂HPO₄0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，NaCl?0.5g/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.01g/L，瓊脂20g/L，pH?7.2～7.4，在25℃條件下培養(yǎng)20天，一個(gè)鏈霉菌菌落在平板上長出，

挑取單一菌落，用劃線法純化后，菌株編號為FTY2。

5.從權(quán)利要求1所述的鏈霉菌FTY2菌株的固體發(fā)酵產(chǎn)物的乙酸乙酯部分分離得到的如下結(jié)構(gòu)式所示的兩個(gè)環(huán)己酰亞胺化合物，