[發(fā)明專(zhuān)利]一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410411598.3
• 申請(qǐng)日: 2014-08-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104133059A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏琴;郭占魁;龐雪輝;朱寶存;閆濤;馬洪敏
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/531
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/531;G01N27/48;G01N33/574
• 代理公司: 無(wú)
• 代理人: 無(wú)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。具體是采用合金負(fù)載分子篩SAPO-34-Pd/Co，制備一種檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的夾心型電化學(xué)免疫傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

癌癥是一大類(lèi)惡性腫瘤的統(tǒng)稱(chēng)。腫瘤在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞異常表達(dá)或宿主細(xì)胞對(duì)腫瘤反應(yīng)后產(chǎn)生的某些物質(zhì),如腫瘤特異性抗原、胚胎抗原、某些分化抗原、激素和同工酶等,可作為腫瘤標(biāo)志物，用于臨床某些腫瘤的診斷和輔助診斷。因此，在臨床研究上，發(fā)展一種快速、簡(jiǎn)便、靈敏的檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物方法是十分重要的。

目前已有的腫瘤標(biāo)志物的臨床檢測(cè)方法很多,如放射免疫分析、酶聯(lián)免疫分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析等。免疫傳感器是將免疫學(xué)方法與分析化學(xué)方法相結(jié)合的一種生物傳感器，通過(guò)抗原與抗體之間的特性性結(jié)合，使得它具有高靈敏性、高選擇性、分析快速和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

電化學(xué)免疫傳感器具有靈敏度高、選擇性好、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、易于小型化、可連續(xù)、快速自動(dòng)化檢測(cè)分析等優(yōu)點(diǎn)，因此本發(fā)明制備了一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)。

石墨烯納米層（GS）具有大的比表面積，催化性能好，生物相容性好，能有效地吸附固載抗原，增強(qiáng)電子傳遞等優(yōu)點(diǎn)，因此本發(fā)明將哌嗪修飾的氨基化石墨烯引入到電化學(xué)免疫傳感器的制備中，利用其生物相容性及大的比表面積，實(shí)現(xiàn)抗體在電極表面的固定；利用其優(yōu)異的電子傳遞能力，起到增強(qiáng)電化學(xué)信號(hào)的作用。

本發(fā)明采用原位化學(xué)還原的方法，制備了合金負(fù)載分子篩SAPO-34-Pd/Co；通過(guò)戊二醛的交聯(lián)作用，實(shí)現(xiàn)了抗體在電極表面的固定；將合金負(fù)載分子篩SAPO-34-Pd/Co引入傳感器的制備中，構(gòu)建了一種超靈敏的夾心型電化學(xué)免疫傳感器。在不使用酶的情況下，合金負(fù)載分子篩SAPO-34-Pd/Co對(duì)雙氧水H₂O₂有良好的催化能力，并在檢測(cè)過(guò)程中產(chǎn)生良好的電化學(xué)信號(hào)，有效地降低了傳感器的檢出限，可用于多種腫瘤標(biāo)志物的分析。該方法具有成本低、靈敏度高、特異性好、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn)，而且制備過(guò)程較為簡(jiǎn)單，有效克服了目前腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法的不足。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是基于合金負(fù)載分子篩SAPO-34-Pd/Co，構(gòu)建了一種無(wú)酶、快速且超靈敏的夾心型電化學(xué)免疫傳感器。

本發(fā)明的目的之二是將該夾心型電化學(xué)免疫傳感器應(yīng)用于多種腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

1.?一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器的制備，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將直徑為4?mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；取6?μL、0.5?~?2?mg/mL的哌嗪修飾的氨基化石墨烯的殼聚糖溶液滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；滴加3?μL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0~2.5%的戊二醛溶液連接抗體和哌嗪修飾的氨基化石墨烯；

（2）在步驟（1）修飾的工作電極表面滴加6?μL、5~10?μg/mL的腫瘤標(biāo)志物一抗，超純水沖洗電極表面，4?℃冰箱中晾干；

（3）在步驟（2）修飾的工作電極表面滴加6?μL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1~2%的BSA溶液，封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4?℃冰箱中晾干；

（4）在步驟（3）修飾的工作電極表面滴加6?μL、0.001~20?ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4?℃冰箱中干燥；

（5）在步驟（4）修飾的工作電極表面滴加6?μL?SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液，置于4?℃冰箱中晾干，制得一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器。

2．上述所述的SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液的制備，步驟如下：

（1）哌嗪修飾的氨基化石墨烯的殼聚糖溶液的制備

將0.5?~?2.0?mg哌嗪修飾的氨基化石墨烯加入到1?mL、0.1%的殼聚糖溶液中，超聲分散10?~?20?min，將溶液保存在4?℃下備用；所述0.1%的殼聚糖溶液，是將1?g的殼聚糖溶于10mL、0.02mol/L的稀鹽酸溶液中；

（2）SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物的制備

1）氨基化分子篩的制備