[發(fā)明專利]一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410411598.3
• 申請日: 2014-08-20
• 公開（公告）號: CN104133059A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏琴;郭占魁;龐雪輝;朱寶存;閆濤;馬洪敏
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N27/48;G01N33/574
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器的制備，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將直徑為4?mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；取6?μL、0.5?~?2?mg/mL的哌嗪修飾的氨基化石墨烯的殼聚糖溶液滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；滴加3?μL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0~2.5%的戊二醛溶液連接抗體和哌嗪修飾的氨基化石墨烯；

（2）在步驟（1）修飾的工作電極表面滴加6?μL、5~10?μg/mL的腫瘤標(biāo)志物一抗，超純水沖洗電極表面，4?℃冰箱中晾干；

（3）在步驟（2）修飾的工作電極表面滴加6?μL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1~2%的BSA溶液，封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4?℃冰箱中晾干；

（4）在步驟（3）修飾的工作電極表面滴加6?μL、0.001~20?ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4?℃冰箱中干燥；

（5）在步驟（4）修飾的工作電極表面滴加6?μL?SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液，置于4?℃冰箱中晾干，制得一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器。

2.如權(quán)利要求1所述的一種合金負(fù)載分子篩電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，所述SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液的制備，其特征在于，包括以下步驟：

（1）哌嗪修飾的氨基化石墨烯的殼聚糖溶液的制備

將0.5?~?2.0?mg哌嗪修飾的氨基化石墨烯加入到1?mL、0.1%的殼聚糖溶液中，超聲分散10?~?20?min，將溶液保存在4?℃下備用；

所述0.1%的殼聚糖溶液，是將1?g的殼聚糖溶于10mL、0.02mol/L的稀鹽酸溶液中；

（2）SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物的制備

1）氨基化分子篩的制備

稱取0.05~1.5?g?SAPO-34于三口燒瓶中，加入0.1~3?mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷和10?mL的無水乙醇，將混合物加熱到70?℃并保持1.0~2.0?h，然后冷卻到室溫，混合物經(jīng)7000?rpm下離心分離5?min，制得氨基化的分子篩NH₂-SAPO-34，用水洗滌并離心分離三次，最后將氨基化的分子篩在35~45℃下真空干燥；

2）SAPO-34-Pd/Co的制備

在氮?dú)獗Ｗo(hù)和冰浴冷卻下，將3~6?mL、0.2?mol/L的硝酸鈷，2.5?mL、64?mmol/L的檸檬酸鈉，20?~40?mg?NH₂-SAPO-34和25?mL超純水混合超聲20?min；

將5?mL、1.6?mol/L的硼氫化鈉溶液以20?mL/h的速率加到上述混合液中并強(qiáng)力攪拌，制得Co納米粒子溶液；

將10?mL、30~60?mmol/L四氯鈀酸鈉Na₂PdCl₄和10?mL、0.16?mol/L的NaBH₄溶液同時以20?mL/h的速率加到Co納米粒子溶液中，混合物再攪拌1?h，然后分離洗滌，并在35?℃下真空干燥，制得SAPO-34-Pd/Co；

3）SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液的制備?

將1~3?mg的SAPO-34-Pd/Co分散到1?mL超純水中，加入100?μL、80~120?μg/mL的二抗Ab₂和900?μL、40~60?mmol/L的pH?7.4磷酸鹽緩沖溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12?h，在4?℃下、6000?rpm轉(zhuǎn)速下離心15?min，得到下層沉淀；再加入1?mL、50?mmol/L?的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液離心洗滌1次，得下層沉淀；最后加入1?mL、50?mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，制得SAPO-34-Pd/Co-Ab₂二抗孵化物溶液，4?℃下保存?zhèn)溆谩?/p>