[發明專利]梅毒螺旋體IgG抗體生物素親和素酶聯免疫檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201410410477.7
• 申請日: 2014-08-20
• 公開（公告）號: CN104155450A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 張惠林;林麗蓉;童曼莉;劉莉莉;楊天賜;張長弓
• 申請（專利權）人: 廈門大學附屬中山醫院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及梅毒的檢測，尤其是涉及梅毒螺旋體IgG抗體生物素親和素酶聯免疫檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

梅毒是梅毒螺旋體引起的性傳播性疾病，近年來在國內的發病率居高不下，梅毒的防控已成為我國公共衛生服務的主要任務之一。

梅毒的實驗室診斷方法主要有如下幾種([1]林麗蓉,楊波,潘錫濤,等.潛在的血源傳播患者梅毒血清學檢測方法的選擇.中華醫院感染學雜志.2010，20(10)：1491-1494)：

(1)病原學檢測：梅毒螺旋體感染早期，當梅毒抗體還未產生或含量較低時，暗視野顯微鏡查找螺旋體成為最早的實驗室診斷方法，但易受取材技術、取材部位、樣本中梅毒螺旋體含量、局部用藥及送檢時間等諸多因素影響，靈敏度較低。

(2)抗體檢測試驗：梅毒螺旋體不能進行體外培養，診斷主要依賴于實驗室檢查，現有的血清學檢測靈敏度、特異性不高，任何一種檢測方法均存在缺陷，臨床漏診和誤診率較高。

用于梅毒血清學檢驗的抗原主要以重組抗原TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47為主([2]Lin,L.R.,Z.G.Fu,et?al.Development?of?a?colloidal?gold-immunochromatography?assay?to?detect?immunoglobulin?G?antibodies?to?Treponema?pallidum?with?TPN17and?TPN47.Diagnostic?microbiology?and?infectious?disease.2010.68(3):193-200.)，這些抗原大多來源于梅毒螺旋體外膜，但不能區分是否為致病性螺旋體所致。

發明內容

本發明的目的是提供一種梅毒螺旋體IgG抗體生物素親和素酶聯免疫檢測試劑盒及其制備方法。

所述梅毒螺旋體IgG抗體生物素親和素酶聯免疫檢測試劑盒，設有：

外包裝盒、濃縮洗滌液瓶、陰性對照品瓶、陽性對照品瓶、生物素標記抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體瓶、辣根過氧化物酶標記親和素瓶、TMB顯色液A瓶、顯色液B瓶、反應終止液瓶、包被有重組抗原微孔板；

濃縮洗滌液瓶、陰性對照品瓶、陽性對照品瓶、生物素標記抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體瓶、辣根過氧化物酶標記親和素瓶、TMB顯色液A瓶、顯色液B瓶、反應終止液瓶和包被有重組抗原微孔板裝在外包裝盒內；

濃縮洗滌液瓶內裝有濃縮洗滌液，陰性對照品瓶內裝有陰性對照品，陽性對照品瓶內裝有陽性對照品，生物素標記抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體瓶內裝有生物素標記抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，辣根過氧化物酶標記親和素瓶內裝有辣根過氧化物酶標記親和素，TMB顯色液A瓶內裝有TMB顯色液A，顯色液B瓶內裝有顯色液B，反應終止液瓶內裝有反應終止液；

所述TMB顯色液A為3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine，TMB)顯色液；

所述顯色液B為3％的過氧化氫溶液。

所述濃縮洗滌液可采用溶有Tween-20的磷酸鹽緩沖液，其中Tween-20的終濃度為0.05％，使用時用蒸餾水進行20倍稀釋。

所述陰性對照品為梅毒螺旋體總抗體陰性對照品，由非梅毒感染的健康人群血清配制而成，使用本試劑盒進行檢測其OD450nm吸光值小于0.1；所述OD450nm為主波長，450nm是測定的樣本顯色吸光值。

所述陽性對照品為梅毒螺旋體總抗體陽性對照品，由梅毒患者的陽性血清配制而成，用本試劑盒進行檢測其OD450nm吸光值大于0.5；所述OD450nm為主波長，450nm是測定的樣本顯色吸光值。

所述TMB顯色液A為3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine，TMB)顯色液，商品名叫TMB顯色液A，市售品可購自廈門波生生物科技有限公司。

所述顯色液B為3％的過氧化氫溶液，商品名叫顯色液B，市售品可購自廈門波生生物科技有限公司。

所述反應終止液可采用摩爾濃度2mmol/L的硫酸。

所述瓶可采用聚乙烯瓶。

所述梅毒螺旋體IgG抗體生物素親和素酶聯免疫檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：