[發明專利]一種百合的根尖脫毒與快繁方法

有效

• 申請號: 201410409288.8
• 申請日: 2014-08-19
• 公開（公告）號: CN104186319A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 陳敏敏;顧俊杰;周音;張建軍;沈強;張平;張宏偉;王暉
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院;上海鮮花港企業發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所 31251
• 代理人: 郭桂峰

技術領域

本發明屬于植物脫毒與組培快繁技術領域，具體涉及一種百合的根尖脫毒與快繁方法。

背景技術

百合(Lilium?spp.)屬于百合科(Liliaceae)百合屬多年生具地下鱗莖的草本球根植物，花朵碩大、花色艷麗、香氣怡人，是世界著名的“五大”切花之一，也是我國重要的農業經濟作物，具有很高的觀賞、食用及藥用價值。中國是世界重要的百合遺傳資源分布地之一，現有百合屬植物約115個種，其中起源于中國的就有55個種和18個變種，占世界百合屬植物的一半以上。近年來，百合的市場需求逐年增加，因此，它具有很好的研究開發和利用價值。

本項目組在對田間百合品種種質資源收集利用及組培快繁過程中發現其存在以下兩個問題：

一是百合田間植株病毒病發病嚴重。目前已報道的百合病毒病約有20余種，其中以百合無癥病毒(LSV)、百合斑駁病毒(LMoV)和黃瓜花葉病毒(CMV)最為嚴重，其他各種病毒病均為局部地區發生。這三種病毒分布廣、危害大，常常復合侵染百合植株，侵染癥狀表現為脈明癥、葉片斑駁、葉片有鑲嵌并萎黃變色，葉片卷曲、出現褐色壞死斑點等，使品種嚴重退化，花小且少，甚至畸形變色，嚴重影響其觀賞品質。不同的病毒在百合上常常表現出相似的癥狀，而同種病毒在不同的條件下的癥狀又有很大變異，這給病害的田間診斷和防治帶來極大困難。針對這一問題，本實驗室已成功采用RT-PCR的檢測方法，對百合病毒進行檢測。

二是傳統的百合莖尖脫毒技術對植株損傷太大，材料不易獲取，脫毒成活率低。目前，對于百合進行脫毒的技術研發仍然集中在：對莖尖脫毒技術進行進一步優化，比如將熱處理脫毒或試劑脫毒與莖尖脫毒結合。例如，申請號為201210050972.2的專利“東方百合種球脫毒方法”即是通過綜合運用熱處理脫毒和莖尖脫毒來提高脫毒率和組培苗成活率。又例如，申請號為201010506318.9的專利“使用病毒靈藥劑對百合脫毒培養的方法”則是在培養基上加入抗病毒藥物，然后在加入抗病毒藥物的培養基上進行組培苗培養，之后再進行莖尖脫毒。

而關于采用以百合根尖為外植體進行脫毒和組培快繁的技術，目前尚未見有文獻報導。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種百合的根尖脫毒與快繁方法。主要解決的技術問題是：百合組織培養過程中傳統的莖尖脫毒技術存在一些缺陷，例如操作繁瑣、對植株損傷太大、材料不易獲取，脫毒成活率低、組培苗污染率高等。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種百合的根尖脫毒與快繁方法，該方法包括以下步驟：

步驟1，采用百合根尖作為外植體，將該外植體接種在根尖伸長培養基上培養，使得外植體根尖拉長；

步驟2，將前述根尖拉長的外植體接種在體胚誘導培養基上培養，誘導所述拉長的根尖產生胚性愈傷組織，達到脫毒和再生的目的。

進一步地，所述步驟1之前還包括百合根尖外植體的獲得，其獲得方法為：將百合無菌苗接種到生根培養基上，待根長至1-2cm時，將根前端0.3-0.5mm的根尖切下作為外植體。另外，為了檢測根尖脫毒效果，還可將攜帶百合病毒的無菌苗接種到生根培養基上，待根長至1-2cm時，將根前端0.3-0.5mm的根尖切下作為外植體；待外植體分化為試管苗后，檢測分化后的試管苗是否還含有之前攜帶的百合病毒，如果不含有則說明已經達到脫毒效果，如果含有則說明未達到脫毒效果。

所述生根培養基的配方為：MS培養基+NAA?0.4-0.6mg/L+蔗糖28-32g/L+瓊脂6-8g/L，PH?5.6-6.0。其中，生根培養基的優選配方為：MS培養基+NAA?0.5mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂7g/l，PH?5.8。

進一步地，所述步驟1中根尖伸長培養基的配方為：MS培養基+NAA0.2-0.5mg/L+蔗糖28-32g/L+瓊脂6-8g/L，pH?5.6-6.0。其中，根尖伸長培養基的優選配方為：MS培養基+NAA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，PH5.8。

進一步地，所述體胚誘導培養基的配方為：MS培養基+毒莠定0.8-1.2mg/L+6-BA?0.4-0.6mg/L+蔗糖28-32g/L+瓊脂6-8g/L，PH?5.6-7.0。其中，體胚誘導培養基的優選配方為：MS培養基+毒莠定1.0mg/L+6-BA?0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，PH?5.8。