[發明專利]一種建立鵝胚上皮細胞系的方法及建立的鵝胚上皮細胞系

有效

• 申請號: 201410408788.X
• 申請日: 2014-08-19
• 公開（公告）號: CN104152403B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 王文秀;沈志強;于金枝
• 申請（專利權）人: 山東省濱州畜牧獸醫研究院
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N7/00;C12R1/91
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

本發明公開了一種建立鵝胚上皮細胞系的方法及建立的鵝胚上皮細胞系。本發明涉及一種建立鵝胚上皮細胞系的方法，其特征在于將原代鵝胚胎組織貼壁法、差速酶消化法和單克隆篩選方法相結合，優化了原代培養條件。此方法操作方法簡便，便于推廣應用。本發明還涉及所述方法建立的鵝上皮細胞系，其保藏號為CCTCC C2014137，該細胞系的建立解決了目前尚未有完善的鵝源細胞系的問題。本發明還涉及一種用于培養和/或增殖小鵝瘟病毒、番鴨細小病毒及I型鴨肝炎病毒及新型鴨肝炎病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的待感染宿主細胞即為或包括所述的鵝胚上皮細胞系。本發明，驗證了所述鵝胚上皮細胞系對小鵝瘟病毒、番鴨細小病毒及I型鴨肝炎病毒及新型鴨肝炎病毒感染的敏感特性。

技術領域

本發明屬于動物細胞工程技術領域，具體涉及一種建立鵝胚上皮細胞系的方法及建立的鵝胚上皮細胞系。

背景技術

我國是水禽生產大國，水禽產量占世界的60％以上，其中鵝的產量約占世界總產量的90％以上。我國的養鵝歷史悠久，據考證，早在距今約6000年前的新石器時代，就已開始馴養鵝。隨著我國經濟的發展及人民生活水平的不斷提高，動物性食物消費比例的增加和消費習慣的改善，促進了農業產業結構的調整和畜牧業生產地位的提高，養鵝業因具有產品用途廣，耗糧少，生產周轉快，投入低，產出高，社會經濟效益好等特點進一步得到社會的認可，養鵝生產迅速發展。據統計，解放前我國僅養鵝1700萬只，上世紀的五十年代增加到6000萬只，八十年代初為1.2億只，八十年代末發展到3億只；根據FAO公布的數據，2011年我國鵝存欄3.32億只，占世界總量的89.72％；2011年我國鵝出欄6.10億只，占世界總量的93.98％；2012年我國鵝出欄數量接近6.29億只。近年仍保持穩定上升趨勢，成為名符其實的世界養鵝大國。養鵝業每年為社會提供鵝肉、羽毛(絨)，在國際上占有優勢地位，已成為國家出口創匯和農民增加收入的支柱產業之一。盡管養鵝業今年發展較快，但鵝產品在國內市場仍供不應求。

上世紀90年代中期以前，鵝病的傳染病只有小鵝瘟、鵝的鴨瘟病、禽出敗、副傷寒、大腸桿菌病、流行性感冒、曲霉菌病等幾種，而90年代后期至今，隨著養鵝業的興旺發展，國內跨省和跨區域交易及引種頻繁，為鵝病的廣泛傳播創造了條件，極易造成鵝病的大規模流行。鵝雖然具有較強的抗病力，但伴隨我國畜禽業的發展及病原微生物的不斷變異，過去不引起鵝發病或很少使鵝發病的一些疾病，現在已經成為養鵝生產必須預防的疾病。近年國內鵝病流行趨勢可看出，鵝的發病種類日趨增多，除了小鵝瘟、細小病毒、禽流感，逐漸出現了一些新的傳染病如雛鵝新型病毒性腸炎、鵝副粘病毒病、鵝出血性壞死性肝炎、法氏囊炎、鵝鴨疫李默氏桿菌病等烈性傳染病。從現實情況看，老的傳染病繼續存在，新的傳染病又不斷發生，加上常見多發的雛鵝感冒、中毒癥(藥物、農藥、有害氣體中毒)、寄生蟲病(重點是絳蟲)，給養鵝業造成嚴重損失，成為規模養鵝業健康發展的制約因素。在諸多的疾病中，鵝傳染性疾病相對危害較大，尤其小鵝瘟病毒、細小病毒、禽流感等病毒性疾病。

鵝病毒的分離多是通過鵝胚或番鴨胚來分離，但是由于目前國內外尚無商品化的無特定病原體(Specific pathogen Free,SPF)鵝胚和番鴨胚，用其分離鵝病毒存在內源病毒干擾等情況，影響病毒的分離。為了更好有效的分離到鵝病毒，及早檢測出病毒，預防疾病爆發，許多國內外的學者都在進行鵝細胞系的研究。但目前尚無商品化的鵝源細胞系。因此，現在急需對其方法改進，建立一株能夠穩定快速傳代的鵝胚細胞系。

發明內容

本發明基于上述領域的空白，利用原代鵝胚胎組織貼壁法、差速酶消化法及單克隆篩選方法相結合，優化了原代培養條件，提供了一種操作簡便，易于推廣的建立鵝胚上皮細胞系的方法，并成功獲得了培養特性穩定、單純、高活力的鵝胚上皮細胞系。本發明的技術方案如下：

建立鵝胚上皮細胞系的方法，其特征在于，包括如下步驟：