[發(fā)明專利]使用PNA探針和等速電泳檢測遺傳序列

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410407430.5
• 申請日: 2014-08-19
• 公開（公告）號: CN104419764A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: M·貝爾科維奇;N·奧斯特洛莫胡;O·施瓦茲
• 申請（專利權(quán)）人: 技術(shù)研發(fā)基金有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 趙蓉民;張全信

1.一種用于序列特異性地檢測和/或分離核酸分子的方法，所述方法包括下述步驟：

a.在第一溶液中使核酸分子的混合物與具有目的序列的標記的肽核酸分子(PNA)接觸，并且獲得核酸分子/PNA雜交物；

b.將所述第一溶液引入等速電泳(ITP)系統(tǒng)的快速前導(dǎo)電解質(zhì)和緩慢終止電解質(zhì)之間，所述ITP系統(tǒng)包括高有效遷移率前導(dǎo)電解質(zhì)(LE)離子的第二溶液和低有效遷移率尾隨電解質(zhì)(TE)的第三溶液；

c.跨越所述第二溶液和所述第三溶液施加電場；

其中所述核酸分子/PNA雜交物而不是游離PNA在所述ITP系統(tǒng)中的尖銳LE-TE界面處聚焦，其中所述TE具有高于PNA探針的遷移率，并且所述TE具有低于核酸分子/PNA雜交物的遷移率，由此序列特異性地分離核酸分子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第二溶液或第三溶液包含所述核酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第二溶液或第三溶液包含所述標記的肽核酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括逆流。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述逆流是電滲或壓力驅(qū)動的。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述逆流用于使所述ITP界面保持靜止。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述PNA是標記的。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述檢測通過使用光檢測器、光電倍增管(PMT)、電導(dǎo)檢測器、放射性檢測器、照相機或其任何組合來實現(xiàn)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述PNA分子由陽離子標記物進行標記。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述PNA分子是：熒光標記的、化學(xué)發(fā)光標記的、放射性標記的或量熱標記的。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述雜交物包含具有10個或更多個核苷酸的核酸分子。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一溶液包含TE。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述PNA除非與所述核酸分子雜交，否則在ITP下不聚焦。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述核酸分子是DNA。

15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述核酸分子是RNA。

16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述LE包含HCl。

17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述LE包含2,2-雙(羥甲基)-2,2',2-次氮基三乙醇。

18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述TE包含2-(N-嗎啉代)乙磺酸。

19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述PNA濃度為1nM-120μM。

20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述標記的PNA包含多個PNA序列，其中每個PNA由不同分子進行標記。

21.一種系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：

(A)具有目的序列的肽核酸(PNA)分子；

(B)DNA分子、RNA分子或其組合；和

(C)等速電泳(ITP)系統(tǒng)，所述ITP系統(tǒng)包括：

(a)包含高有效遷移率前導(dǎo)電解質(zhì)(LE)離子的溶液的第一區(qū)帶；

(b)包含低有效遷移率尾隨電解質(zhì)(TE)離子的溶液的第二區(qū)帶；以及

(c)陽極和陰極。

22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的系統(tǒng)，其中所述PNA分子是標記的。

23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的系統(tǒng)，其中所述PNA分子由陽離子標記物進行標記。

24.根據(jù)權(quán)利要求21所述的系統(tǒng)，其中所述PNA分子是：熒光標記的、化學(xué)發(fā)光標記的、放射性標記的或比色標記的。

25.根據(jù)權(quán)利要求21所述的系統(tǒng)，其中所述TE包含MES(2-(N-嗎啉代)乙磺酸)。

26.根據(jù)權(quán)利要求21所述的系統(tǒng)，其中所述LE包含鹽酸。