[發明專利]人A群鏈球菌量子點免疫層析檢測卡及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410406457.2
• 申請日: 2014-08-18
• 公開（公告）號: CN105277694B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 胡征;楊波;董俊
• 申請（專利權）人: 董俊
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/532
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 余曉雪,王敏鋒

技術領域

本發明涉及醫學檢測技術領域，具體為一種人A群鏈球菌(M1，3，5，6，24血清型)量子點免疫層析檢測卡及其制備方法和應用。

背景技術

鏈球菌廣泛分布于自然界和動物體內，可長期寄居于人體鼻咽部和腸道中。為革蘭氏陽性菌，呈球狀或卵圓形，為需氧或兼性厭氧菌，對營養要求較高。鏈球菌種類繁多，根據溶血能力分為α、β、γ溶血性鏈球菌，又稱之甲型、乙型、丙型溶血性鏈球菌。根據鏈球菌胞壁所含多糖(C抗原)的不同分為A～V等20族(其中缺I和J)，(Lancefield分型)。對人類有致病性的鏈球菌90％屬于A群。鏈球菌C抗原的外層還具有M、T、R、S4種型特異性抗原。M抗原主要見于A群，根據M抗原的不同又可分為90多個血清型，其中在我國能引起風濕熱的臨床上最常見的血清型為M1，M3，M5，M6，M18，M24等。A群鏈球菌(groupAstreptococci，GAS)又稱化膿性鏈球菌(streptococcuspyogenes)，為β溶血性鏈球菌。A群鏈球菌感染和后遺癥一直是困擾公共健康和國民經濟的嚴重問題，尤對兒童和青年影響最大。A群鏈球菌感染最常發生于冬春季和雨季，在兒童發病年齡多見于5～15歲，臨床可把A群鏈球菌感染分為四類：①淺表部位感染：咽炎、皮膚和軟組織感染、膿皰瘡、丹毒、陰道炎、產后感染；②深部感染：菌血癥、壞死性筋膜炎、深部組織感染、蜂窩織炎、肌炎、膿毒敗血癥、心包炎、腦膜炎、肺炎、化膿性關節炎；③毒素介導：猩紅熱、鏈球菌中毒性休克綜合征；④免疫介導：風濕熱、鏈球菌感染后腎小球腎炎、反應性關節炎。

臨床病人由于不同的呼吸道病原體(如副流感病毒、流感嗜血桿菌、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等)感染引起疾病癥狀可以十分相似，這導致了流行診斷比較困難，確診往往依賴于實驗室診斷。快速有效的診斷方法應該是在疾病的發病初期就可以得到明確的診斷，便于實施針對性的治療，阻止病情的發展遷延。

盡管A群鏈球菌在全球范圍內傳播，但可用于實驗室診斷的標準化商品試劑的種類極少。目前，A群鏈球菌的檢測主要有以下幾種方法：

一、常規實驗室檢測

1、細菌分離

細菌培養是診斷A群鏈球菌感染的“金標準”。樣本采集后最好立即接種到血瓊脂培養基上。若無條件及時接種，應使用轉運培養基。將標本接種在血瓊脂平皿，35～37℃，含有5％～10％CO₂或厭氧條件下孵育，可增加A群鏈球菌的分離率。血瓊脂平皿孵育24～48h。A群鏈球菌菌落常不能與其他β一溶血性鏈球菌區別，特別是C群和G群，需采用血清學方法進行最后鑒定。該法培養所需時間長，操作步驟繁多，且若采樣前患者使用過抗菌藥物，會造成培養結果的假陽性。這樣在臨床方面對病人的治療就有一定的局限性。

2、血清學檢測

即采用酶聯免疫法、放免法、微量免疫熒光法等，檢測被檢者血清中A群鏈球菌抗體水平，可間接提示A群鏈球菌感染的存在。然而，血清學試驗只能提供一種回顧性的診斷，它需要同時檢測患者急性期和恢復期的雙份血清，如果恢復期中抗人A群鏈球菌抗體效價比急性期高4倍或4倍以上才有診斷意義。另外，臨床上主要檢測的抗體為抗鏈球菌素O，而統計學研究表明大約20％的病人并不出現出現抗鏈球菌素O水平的升高，故現有血清學方法的檢測質量受到一定限制。

二、快速診斷

直接檢查人A群鏈球菌蛋白抗原和菌體核酸可達到快速診斷的目的，目前主要有免疫熒光法、免疫酶法和PCR法等。免疫熒光法和免疫酶法均不能進行一步檢測，均存在操作步驟復雜，需要專業人員操作，檢測時間長(2h以上)，成本較高等缺點。PCR法主要是檢測鏈球菌特異性rRNA序列，其檢測快速、靈敏、特異，是目前研究A群鏈球菌感染的重要手段，但由于PCR對實驗設備以及操作要求較高，且易出現假陽性，在我國還不能作為常用的臨床診斷方法。目前，檢測人A群鏈球菌抗原的方法主要為膠體金法檢測其C多糖抗原，但是膠體金法敏感度較低，對樣品材料質量要求較高，同時在檢測前還必須對樣品進行細胞裂解以釋放C多糖，而添加細胞裂解液的量又對檢測靈敏度有較大的影響。因此，建立具備快速、高靈敏度的A群鏈球菌特異性抗原快速診斷法十分必要。

發明內容

本發明針對背景技術中現存的幾種人A群鏈球菌在檢測方式中遇到的技術瓶頸，提出了一種具有操作簡便、檢測快速、可定量及高靈敏度等優點的人A群鏈球菌(M1，3，5，6，24血清型)量子點免疫層析檢測卡及其制備方法和應用。

本發明的目的是通過以下技術手段來實現的：