[發明專利]基于磁性分離和量子點標記的人肺炎支原體快速檢測方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201410406387.0
• 申請日: 2014-08-18
• 公開（公告）號: CN105203768B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 胡征;楊波;董俊
• 申請（專利權）人: 董俊
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所42001
• 代理人: 余曉雪,王敏鋒

1.一種基于磁性分離和量子點標記的檢測人肺炎支原體抗原的方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

1)兔抗人肺炎支原體P1蛋白多克隆抗體的制備；

2)鼠抗人肺炎支原體P1蛋白多克隆抗體的制備；

3)將步驟1)制備得到的兔抗人肺炎支原體P1蛋白多克隆抗體與納米磁珠通過共價偶聯，制備抗人肺炎支原體免疫納米磁珠；

4)將步驟2)制備得到的鼠抗人肺炎支原體P1蛋白多克隆抗體與納米量子點通過共價偶聯，制備量子點標記的抗人肺炎支原體納米探針；

5)取人呼吸道分泌物樣本，用PBST緩沖液溶解后，加入步驟3)制備得到的抗人肺炎支原體免疫納米磁珠，充分混合，反應25-45min后進行磁分離，以PBST緩沖液洗滌2遍后，向磁分離得到的沉淀物中加入步驟4)制備得到的量子點標記的抗人肺炎支原體納米探針，反應25-45min后進行磁分離，以PBST緩沖液洗滌2遍后，使用熒光酶標儀讀取熒光值；所述PBST緩沖液中各成分含量如下：8g/LNaCL，0.2g/LKCl，0.24g/LKH₂PO₄，1.44g/LNa₂HPO₄，0.5ml/LTween-20，所述PBST緩沖液的pH＝7.4；

6)根據步驟1)-步驟5)的方法分別檢測四份經臨床確定為人肺炎支原體陰性的人群的呼吸道分泌物樣品，讀取熒光值；所述人肺炎支原體陰性的人群的呼吸道分泌物樣品簡稱人肺炎支原體陰性對照樣品；所述四份人肺炎支原體陰性對照樣品的熒光值的平均值與3倍標準差之和即為CUT-OFF值；若步驟5)中人呼吸道分泌物樣本的檢測熒光值大于CUT-OFF值，則判斷為人呼吸道分泌物樣本中人肺炎支原體抗原為陽性；若步驟5)中人呼吸道分泌物樣本的檢測熒光值小于CUT-OFF值，則判斷為人呼吸道分泌物樣本中人肺炎支原體抗原為陰性。

2.一種基于磁性分離和量子點標記的檢測人肺炎支原體抗原的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒由具有富集人肺炎支原體抗原功能的抗人肺炎支原體免疫納米磁珠、量子點標記的抗人肺炎支原體納米探針、質控品以及PBST緩沖液所組成；所述質控品包括陽性質控品以及陰性質控品；所述陽性質控品由滅活的人肺炎支原體干燥結合到拭子上而成；所述陰性質控品是經臨床確定為人肺炎支原體陰性的人群的咽拭子。