[發明專利]一種新型檢測人布魯氏菌病抗體的免疫層析試紙及制備方法

在審

• 申請號: 201410405061.6
• 申請日: 2014-08-18
• 公開（公告）號: CN104360058A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 石峰;王遠志;陳創夫;程婷婷;錢紅;李志強
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于免疫學診斷檢測技術領域，具體涉及一種檢測對人感染布魯氏菌后體內產生抗體檢測試紙及其制備方法。本發明還涉及到作為布魯氏菌IV型蛋白分泌系統家族之一的VirB5作為診斷抗原的基因工程制備過程，及其在這種蛋白在布魯氏菌抗體檢測方面的應用。?

技術背景

布魯氏菌病(Brucellosis，簡稱布病)是一種嚴重危害人和家畜健康的“再現性”(reemerging)人畜共患傳染病，是《中華人民共和國傳染病防治法》中規定管理的乙類傳染病。全球約有170個國家和地區流行此病。近年來，布魯氏菌病的人畜疫情在世界范圍內均出現了回升勢頭，并呈持續增長態勢，愈演愈烈。我國除澳門和臺灣疫情未知外，所有的省級單位均已報告或發現布病病例，并且一經發現，病例就會很快增加。近20年來，我國的布病病例持續增加，1998年以后，人布魯氏菌病疫情強勢升高，發病人數逐年上升，2013年報告新發病例，發病率3.14/10萬，較上一年同期上升18.91％。布病的主要流行區集中于我國的“三北”地區，即東北、華北和西北，以內蒙古、新疆、黑龍江、吉林等地疫情尤為嚴重。根據布魯氏菌的細菌學特征和感染宿主的親嗜性，傳統上將布魯氏菌屬分為6個種，即牛種布魯氏菌、羊種布魯氏菌、豬種布魯氏菌、犬種布魯氏菌、綿羊附睪種布魯氏菌和沙林鼠種布魯氏菌。?

布魯氏菌病是一種全身性的疾病，感染后不及時的診斷和治療多呈現療程長，預后差、勞動力損失大，衛生消費需求高等特點，給個人、家庭和社會造成極大的經濟損失，甚至由此造成的因病致貧，因病返貧現象非常突出，已成為威脅經濟發展和社會穩定的重要因素之一。由于布病患者臨床表現無特異性，臨床誤診很容易錯過布病患者急性期最佳治療期，從而轉變為很難治愈的慢性期，造成布病患者生活質量嚴重下降。目前，布病的診斷主要依賴于實驗室診斷，主要包括以下幾種方法：①細菌培養法；②血清學診斷方法：虎紅平板凝集實驗，緩沖平板凝集實驗，補體結合實驗，酶聯免疫吸附實驗，熒光偏振實驗，乳汁環狀實驗，布魯氏菌素皮膚實驗等。病原分離法雖精確，但耗時長，陽性檢出率低，對分離環境要求高。虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗因操作簡便、無需特殊設備，成為我國目前檢測人布病和家畜布病常用的方法，但是存在判定結果主觀性強、易出現假陽性或漏檢的等不足。?

在我國邊遠地區的基層診療機構和畜牧獸醫站缺少專業的檢測儀器設備和技術人員，因此，開發一種具有簡單經濟、方便快速的檢測方式對該病控制治療顯得尤為重要。膠體金免疫層析技術因簡單快速、靈敏度高、特異性好、穩定性高、不需要專業的操作人員、無需特殊的儀器設備且結果判斷直接的優點而被廣泛的應用于各類疾病檢測中。因為簡單(試紙條的形式呈現)、快捷(一個測試僅僅需要5min)、經濟并且易于使用，免疫層析檢測技術已經廣泛應用于環境檢測；動植物檢疫；食品安全；臨床診斷等方面。因此，免疫層析技術是非常適宜于我國布魯氏菌病高發地區的檢測技術。?

近年來，應用于布魯氏菌病的抗體檢測中的診斷抗原有，最常見的就是布魯氏菌的LPS、外膜蛋白?BP26、L7/L12蛋白等。但是在我們長期的應用實踐中，我們發現布魯氏菌定位于細菌表面蛋白外側VirB5蛋白是近年來對該病的研究熱點；該蛋白是布魯氏菌的IV型蛋白分泌系統家族之一，VirB5對細菌在細胞內生存和繁殖具有重要意義。更重要的是我們發現VirB5蛋白具有較高的免疫原性，作為該病的診斷抗原具有明顯的優勢：檢測布魯氏菌抗體假陽性低、靈敏度高等特點，而且VirB5蛋白作為膠體金標記的免疫層析試紙條的包被抗原，檢測結果穩定，蛋白不易失活等優點。?

發明內容