[發明專利]一種喇叭唇石斛的無激素組織培養方法

在審

• 申請號: 201410401179.1
• 申請日: 2014-08-13
• 公開（公告）號: CN105325290A
• 公開（公告）日: 2016-02-17
• 發明（設計）人: 姚春;白燕冰;李澤生
• 申請（專利權）人: 云南省德宏熱帶農業科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于農業技術領域，具體涉及一種喇叭唇石斛的無激素組織培養方法。

背景技術

喇叭唇石斛(Dendrobiumlituiflorum)為蘭科石斛屬多年生草本植物，石斛是傳統名貴中藥材，在《神農本草經》、《本草綱目》等古書中均有記載，現已證實它具有滋陰清胃、生津益胃、止咳潤肺、潤喉明目、提高人體免疫功能、防治腫瘤及心血管疾病、改善睡眠等功效。喇叭唇石斛加工成的楓斗味甘、柔韌、黏性強，被視為僅次于鐵皮楓斗的藥材珍品。近年來，隨著人們的大量采挖，加之生長條件和分布的局限，野生石斛資源處于極度瀕危狀態，為保護野生石斛資源、持續發展石斛產業，國家鼓勵開展石斛快繁技術研究，推廣人工種植優質石斛品種。

喇叭唇石斛種子極小，無胚乳，自然條件下很難萌發，而傳統的分株、扦插等方式繁殖率低。但是通過組培技術，種子可在無菌條件下進行萌發，經過原球莖階段形成植株，由于每個石斛蒴果內都含有大量的種粉，此技術可在短時間內培育出大量優質石斛種苗，滿足快繁的需要。喇叭唇石斛組織培養技術的研究推廣可有效挽救瀕危的野生石斛資源，對石斛種質資源的保存具有重要意義。

關于喇叭唇石斛的組織培養也有相關報道，2004年，常俊等人在《中國中藥》上發表了“喇叭唇石斛組織培養的研究”，但在組織培養的過程中添加了一定的激素，激素的長期使用容易導致組培苗發生變異、優良性狀退化等，嚴重擾亂了植物的自然生長規律，作為藥用植物來講，外源激素的使用不利于人的健康，而產品質量安全目前已成為人們在選購產品前最關心的問題，所以激素的使用在一定程度上制約著石斛產業的發展。本發明使用的方法不添加任何激素，用土豆泥、香蕉泥、西瓜汁等添加物代替激素作用，并減少繼代次數，縮短了培養周期，既能滿足市場種苗需求，又保障了石斛產品質量，降低了組培生產成本。

發明內容

本發明是針對目前石斛組培過程中普遍使用各種激素的問題提供一種綠色、環保、安全、簡單便捷的喇叭唇石斛的無激素組織培養方法。該方法操作簡單，成本低廉，較好地解決了目前石斛組織培養過程中成本高、激素使用過量等問題，既可滿足市場種苗需求，又能有效保障石斛產品質量。

喇叭唇石斛的無激素組織培養方法，具體包括以下步驟：

(1)種子的無菌萌發

將成熟未開裂的喇叭唇石斛蒴果經消毒處理，種子均勻播入3/4MS培養基+土豆泥40～70g/L培養基中，培養條件：培養溫度23～26℃，先暗培養7～12d，再光照培養，每天光照10h，光照強度1500～3000lx；

(2)原球莖的增值分化

將綠色原球莖轉入3/4MS培養基+土豆泥100～120g/L+香蕉泥20～40g/L培養基中培養，培養條件：培養溫度23～26℃，每天光照10h，光照強度1500～3000lx；

(3)無菌苗的生根壯苗培養

將原球莖分化出的2～3cm的幼苗轉入1/2MS培養基+土豆泥80～100g/L+香蕉泥20～30g/L+西瓜汁20～30g/L+活性炭0.4g/L培養基中培養，培養條件：培養溫度25～28℃，每天光照10h，光照強度2000～3000lx；

(4)無菌苗的煉苗及移栽

煉苗：當瓶內80％以上的苗長至株高5～8cm，有5～8條3cm以上的粗壯根時可進行出瓶，方法是將可以出瓶的瓶苗從培養室內移置遮光率為70％～85％的溫室大棚內，放置20d，之后再打開瓶蓋繼續放置7d，棚內要保持通風透氣，控制好光照，使瓶苗逐漸接受自然光，適應自然環境；

移栽：移栽時將苗從瓶內取出，用自來水將附在根上的培養基清洗干凈，然后放進稀釋2000倍的多菌靈、百菌清等殺菌劑溶液中消毒3～5min，撈起放在透氣塑料筐上晾干水分，按3株/叢，株行距5cm×5cm移栽到鋪好基質的苗床上，基質選用透氣的椰殼+水苔，栽后注意保持環境通風、遮陽，苗床上無積水，濕度保持在75％～85％之間，待苗抽出新芽、新葉、新根后即可移栽大田；

以上培養基PH值均為5.8～6.0，白糖25g/L，瓊脂4.8g/L，土豆泥為新鮮土豆去皮切絲煮20min后用果汁機打碎成泥，香蕉泥為新鮮香蕉去皮煮20min用果汁機打碎成泥，西瓜汁為新鮮西瓜削去青色外皮把白色的皮和瓤一起煮20min后用果汁機打成汁。