[發明專利]漢城型漢坦病毒的Taqman探針熒光定量快速檢測方法有效
| 申請號： | 201410386807.3 | 申請日： | 2014-08-08 |
| 公開（公告）號： | CN104152581A | 公開（公告）日： | 2014-11-19 |
| 發明（設計）人： | 盛金良;郭剛;王凌波;吳熙然;何冰;高博;楊霞;李卉;王燕;孫德強 | 申請（專利權）人： | 盛金良 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 無 | 代理人： | 無 |
| 地址： | 833418 新疆維吾爾自*** | 國省代碼： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 漢城 型漢坦 病毒 taqman 探針 熒光 定量 快速 檢測 方法 | ||
1.漢城型漢坦病毒的Taqman探針熒光定量快速檢測方法，其特征在于按照以下步驟進行：
步驟1：熒光定量PCR引物和探針設計；
根據已克隆和測序的漢城型漢坦病毒M基因序列設計熒光定量PCR引物和探針，序列如下：
上游引物序列為：
5’-CAGCAGAAATCCCTCTTGTCC-3’；
下游引物序列為：
5’-TGGGTTTGTGAGATGCCTTTTA-3’；
探針序列為：
5′-fam+ACAGATAATGCTCATGGCGTTGGGA+tamara-3′；
步驟2：取200ul離心管，利用移液器依次加入PremixExTapTM(2×)10.0μl，上游引物0.4μl，下游引物0.4μl，熒光探針溶液0.8μl，模板DNA2.0μl，滅菌蒸餾水6.4μl，總體積共計20.0μl，放入離心機瞬時離心，將離心管放入熒光定量PCR儀進行檢測。
2.按照權利要求1所述漢城型漢坦病毒的Taqman探針熒光定量快速檢測方法，其特征在于：所述步驟2中上游引物、下游引物、熒光探針溶液使用濃度均為10μM。
3.按照權利要求1所述漢城型漢坦病毒的Taqman探針熒光定量快速檢測方法，其特征在于：所述步驟2中熒光定量PCR儀為lightcycle480II。
4.按照權利要求1所述漢城型漢坦病毒的Taqman探針熒光定量快速檢測方法，其特征在于：所述步驟2中熒光定量PCR儀檢測條件為：熒光定量PCR儀進行循環參數設置為：預變性95℃30秒，1個循環，95℃5秒，60℃20秒，50個循環，在60℃檢測熒光閾值。
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