[發明專利]奶牛致病菌五重PCR反應試劑盒

有效

• 申請號: 201410384616.3
• 申請日: 2014-08-07
• 公開（公告）號: CN104152555A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 楊玉英;胡婧;翟軍軍;孫海英
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/04;C12R1/19;C12R1/42;C12R1/01
• 代理公司: 大慶市建華專利事務所 23119
• 代理人: 孫薇

1.一種奶牛致病菌五重PCR反應試劑盒，包括10×PCR反應緩沖液，Mg²⁺，dNTP，引物和Taq酶，其特征在于：所述的引物為：

(1)檢測產腸毒素性大腸桿菌LT基因的引物：

F1：5′-CTGACTCTAGACCCCCAGATGAAAT-3′(SEQ?ID?No.1)

R1：5′-CTGTCCTGCTAAGTGAGCACTTCTC-3′(SEQ?ID?No.2)

(2)檢測產腸毒素性大腸桿菌ST基因的引物：

F2：5′-AAAACCAGATAGCCAGACAATTAAC-3′(SEQ?ID?No.3)

R2：5′-AGGATTACAACAAAGTTCACAGCAG-3′(SEQ?ID?No.4)

(3)檢測沙門氏菌invA基因的引物：

F3：5′-GATTTGTCCTCCGCTCTGTCTACTT-3′(SEQ?ID?No.5)

R3：5′-CAATACGATGCTGTTATCGTCCAGG-3′(SEQ?ID?No.6)

(4)檢測金黃色葡萄球菌nuc基因的引物：

F4：5′-TAGGGATGGCTATCAGTAATGTTTC-3′(SEQ?ID?No.7)

R4：5′-CCATCAGCATAAATATACGCTAAGC-3′(SEQ?ID?No.8)

(5)檢測單核細胞增生性李氏桿菌hlyA基因的引物：

F5：5′-TATGATGACGAAATGGCTTACAGTG-3′(SEQ?ID?No.9)

R5：5′-GAACAATTTCGTTACCTTCAGGATC-3′(SEQ?ID?No.10)。

2.根據權利要求1所述的奶牛致病菌五重PCR反應試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒的反應體系為10×Buffer?5μL，25mmol·L^-1的Mg²⁺6μL，5U·μL^-1的Taq酶0.4μL，dNTP?3.0μL，模板DNA?1.0μL，10μmmol·L^-1的上、下游引物各0.5μL，用滅菌去離子水補至50μL。

3.根據權利要求1所述的奶牛致病菌五重PCR反應試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒的反應條件為94℃預變性5min，94℃變性45s，63℃退火45s，72℃延伸45s，共進行30個循環，最后72℃終延伸10min。