[發明專利]一種快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法在審
| 申請號： | 201410383891.3 | 申請日： | 2014-08-06 |
| 公開（公告）號： | CN104328108A | 公開（公告）日： | 2015-02-04 |
| 發明（設計）人： | 翟仙敦;莫耀南;秦豪杰;張振芳;薛小琦;趙貴森;艾紅偉 | 申請（專利權）人： | 河南科技大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛愛周 |
| 地址： | 471003 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 提取 純化 福爾馬林 固定 組織 dna 方法 | ||
1.一種快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：包括以下步驟：
(1)取福爾馬林固定組織，蒸餾水沖洗后破碎組織，用濾紙吸干；
(2)在步驟(1)的組織中加入無水乙醇浸泡1～5分鐘，離心，棄去上清；再依次加入濃度70～80％的乙醇和濃度40～60％的乙醇，重復以上步驟，最后留取沉淀；
(3)在步驟(2)留取的沉淀中加入細胞裂解液、十二烷基磺酸鈉和蛋白酶K，在溫度55～65℃下孵化處理，離心，取上清液；
(4)在步驟(3)的上清液中加入鹽，混勻，在溫度-4～4℃下靜置分層，離心，取上清液；
(5)在步驟(4)的上清液中加入DNA結合液，混勻，轉移到固定有二氧化硅膜的套管內，離心，棄去液體，洗脫DNA，即得。
2.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(2)中離心的轉速為10000～12000rpm，離心時間3～5分鐘。
3.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(3)中細胞裂解液組成為：NaCl?0.4mol/L、Tris-HCl?0.01mol/L、EDTA?0.002mol/L，余量為水。
4.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(3)中孵化處理的時間為8～10小時。
5.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(3)中離心的轉速為11000～15000rpm，離心時間8～15分鐘。
6.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(4)中鹽為氯化鈉。
7.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(4)中靜置的時間為5～15分鐘。
8.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(5)中DNA結合液組成為：5mol/L鹽酸胍，35％乙醇。
9.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(5)中離心的轉速為3000～4000rpm，離心時間1～5分鐘。
10.根據權利要求1所述的快速提取和純化福爾馬林固定組織中DNA的方法，其特征在于：所述步驟(5)中在洗脫DNA前，需采用濃度70～80％乙醇洗滌套管，再用蒸餾水洗脫DNA。
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