[發明專利]一種枯草芽孢桿菌生產抗菌肽的后提取工藝有效

申請號：	201410382361.7	申請日：	2014-08-06
公開（公告）號：	CN104130318A	公開（公告）日：	2014-11-05
發明（設計）人：	郭海巖;劉剛;王茂超;王興業;張淑蘭;王亮;郭莎莎;王雅靜;王紅軍	申請（專利權）人：	山東仙普愛瑞科技股份有限公司
主分類號：	C07K14/32	分類號：	C07K14/32;C07K1/34
代理公司：	濟南舜源專利事務所有限公司 37205	代理人：	尉金洪
地址：	261500 山東省***	國省代碼：	山東;37
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種枯草芽孢桿菌生產抗菌提取工藝
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種提取工藝，適用于抗菌肽的生產，尤其適用于利用枯草芽孢桿菌生產抗菌肽，具體地說，涉及一種枯草芽孢桿菌生產抗菌肽的后提取工藝，屬于生物技術領域。

背景技術

抗菌肽（Antimicrobial?peptides，AMP）是指生物體內經誘導產生的一類具有抗菌活性的小分子多肽，是天然免疫防御系統的一部分。這類蛋白通常具有耐酸性能好、抗菌譜廣、水溶性好、安全性高以及作用快速等特點。其作用機理是，抗菌肽通過蛋白凝聚效應，將其末端尾鏈直接插入細菌細胞膜，打孔形成一個通道，使細菌內容物外泄導致細菌死亡。與抗生素相比，抗菌肽具有不殺滅益生菌、提高機體免疫機能、無副作用、無殘留、無耐藥性、可長期使用等優點。因抗菌肽所具有的特性，可將其廣泛應用于多個領域。在醫藥方面，抗菌肽可平衡和調節炎癥應答并激發抗原特異性的適應性免疫反應。在食品防腐方面，抗菌肽作為一種天然防腐劑，毒副作用小，可降解，使用安全，甚至對人體有保健作用。在飼料添加劑方面，抗生素的濫用已極大地影響了我國畜牧業的發展，而抗菌肽恰恰解決了其耐藥殘留、抗藥性、環境污染等問題，是一種環保型高效飼料添加劑。

在以上這些領域，我國與國際上一些發達國家相比技術上和普及方面還有不小的差距，并且由于各方面的原因，我國目前尚未全面禁止飼用抗生素，而多數抗生素飼料添加劑為國外已淘汰或將被禁用的產品，這些問題無疑將影響我國畜產品在國際上的聲譽，并造成巨大的經濟損失。由于微生物生產抗菌肽有成本低、無毒害、周期短等明顯優點，加快抗菌肽的研究已勢在必行，但當前研究主要集中在乳酸菌，而乳酸菌產生的抗菌肽存在著耐熱性差、抗菌譜窄等缺陷?？莶菅挎邨U菌產的抗菌肽抑菌譜廣、穩定性高，開始引起國內外研究人員的注意，而對于其發酵產生抗菌肽的工業化生產，尤其是后提取工藝，目前仍然面臨成本過高，過程復雜，產物效價損耗過大等問題。

發明內容

本發明所解決的技術問題是針對現有技術的不足，以枯草芽孢桿菌為生產菌株，通過對發酵液的后期處理將其加工成抗菌肽成品，具有操作工藝簡單、步驟較少，生產成本較低且產品效價較高的優點。

為解決以上技術問題，本發明采用以下技術方案：一種枯草芽孢桿菌生產抗菌肽的后提取工藝，其特征在于：所述后提取工藝包括依次進行的放罐、離心、膜分離、調節pH值和噴霧干燥步驟。

采用該技術方案，所述后提取工藝的工藝簡單、步驟少，且提取效果好。

一種優化方案，所述膜分離步驟中將離心后的上清液進行分級過濾，過濾溫度40℃，陶瓷膜設備的進出口壓降為0.1～0.15MPa，平均通量為0.5m3/h，除去菌體和雜蛋白率達到99.97%～99.99%，膜分離后的上清液中抗菌肽的抑菌效價為12689～12813。

采用該技術方案，除去菌體和雜蛋白的效果好，且有效保證抗菌肽的活性。

另一種優化方案，所述分級過濾包括四級過濾；

第一級過濾采用50萬分子量陶瓷膜，第二級過濾采用35萬分子量陶瓷膜，第三級過濾采用15萬分子量陶瓷膜，第四級過濾采用5萬分子量陶瓷膜。

采用該技術方案，利用分級過濾，更加有效地去除上清液中的菌體和雜蛋白。

再一種優化方案，所述調節pH值步驟中：收集膜分離后的清液，調整pH值至3.5，靜置24h后，濾除上層上清液得到含沉淀物的濃縮液，重復濾除操作直至濃縮液體積為調整pH值前上清液體積的50%。

采用該技術方案，既保證了濃縮液中有效成分的含量，又利于后續工序的進行，為快速高效獲得抗菌肽干粉打下良好的基礎。

進一步的優化方案，所述濃縮液中加入25%麥芽糊精作為賦型劑攪拌均勻后，按照50?L/h的處理量進行噴霧干燥得到抗菌肽干粉。