[發明專利]一種測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法

有效

• 申請號: 201410380612.8
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN104101665A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 儲繼紅;李長印;居文政;劉史佳;張軍;許美娟;吳婷
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法。

背景技術

球毛殼堿甲(Chaetoglobins?A)是從藥用植物白茅的內生真菌球毛殼菌(Chaetomium?globosum)中分離得到的生物堿類新化合物。體外實驗證明Chaetoglobins?A具有顯著的抗腫瘤作用，能抑制原癌基因表達及癌細胞擴散，對人乳腺癌細胞株MCF-7和結腸癌細胞株SW1116均有明顯抑制，是一種具有良好開發前景的新藥源化合物。其結構式如下：

目前尚未關于Chaetoglobins?A體內測定方法的文獻報道。本發明建立了Chaetoglobins?A在大鼠體內的測定方法，通過該方法對Chaetoglobins?A的藥物代謝情況進行探索性研究。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是建立一種準確高效測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

一種測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，血漿樣品經預處理后經液質聯用系統檢測其濃度，具體方法包括如下步驟：

(1)血漿樣品預處理：取血漿樣品，加入內標替硝唑甲醇溶液和乙酸水溶液，加入甲醇或乙腈進行蛋白沉淀，離心后取上清液；

(2)將步驟(1)預處理后的血漿樣品進行液相色譜分離：色譜條件中色譜柱為安捷倫ZORBAX?SB-C18柱；流動相：體積比為50:50的甲醇與水；流速：0.2-0.5mL·min^-1；柱溫：30-40℃；進樣量10μL；洗脫方式為等度洗脫；

(3)質譜測定，條件為：離子源：電噴霧離子化電離源ESI；離子檢測方式：多反應監測MRM；離子極性：正離子；毛細管電壓：3.0KV；離子源溫度：80-120℃；脫溶劑溫度：340-360℃；脫溶劑氣：400L/h；錐孔電壓：45V；錐孔氣：35L/h；脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣；檢測對象的離子通道：球毛殼堿甲，[M-H]+，m/z637.30→549.20，Dwell0.5，Cone45，Collision?Energy35；內標替硝唑，[M-H]+，m/z248.20→121.00，Dwell0.5，Cone30，Collision?Energy15；

(4)計算：采用內標法，以球毛殼堿甲和內標替硝唑的峰面積比值代入標準曲線方程計算球毛殼堿甲的濃度。

步驟(1)中，取血漿樣品50μL，加入內標1000ng·mL^-1替硝唑甲醇溶液10μL和20％(v/v)乙酸水溶液5μL，加入190μL甲醇或乙腈，振蕩3min，12000rpm離心10min，離心后取上清液。

步驟(2)中，色譜柱長度為150mm，內徑為2.1mm，填料粒徑為5μm。

其中，所述的血漿為給予了含球毛殼堿甲藥物的血漿。

其中，所述血漿為人或動物的血漿。

其中，所述血漿為大鼠血漿。

有益效果：本發明方法與現有技術相比具有如下優勢：

(1)預處理方法簡便：一步有機溶媒蛋白沉淀法，適用于常規測定。

(2)專屬性強：采用安捷倫ZORBAX?SB-C18色譜柱作為固定相，甲醇和水的混合液作為流動相，等度洗脫，Chaetoglobins?A保留時間為2.67min左右，內標替硝唑保留時間為2.43min左右，4.5min完成測定，內源性物質不干擾二者的測定。

(3)靈敏度高：血漿最低定量限為2ng·mL^-1。

(4)本發明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，為Chaetoglobins?A的血藥濃度測定提供依據，具有新藥開發的前景。本方法的血漿標準曲線線性范圍為2～1000ng·mL^-1，日內和日間精密度RSD均小于5％。

附圖說明

圖1為甲醇加入Chaetoglobins?A和內標對照品的質譜圖。

圖2為大鼠空白血漿的質譜圖。

圖3為大鼠空白血漿加入Chaetoglobins?A和內標對照品的質譜圖。

圖4為大鼠給予Chaetoglobins?A后血漿樣品再加入內標對照品的的質譜圖。