[發明專利]一種測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法

有效

• 申請號: 201410380612.8
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN104101665A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 儲繼紅;李長印;居文政;劉史佳;張軍;許美娟;吳婷
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，血漿樣品經預處理后經液質聯用系統檢測其濃度，具體方法包括如下步驟：

(1)血漿樣品預處理：取血漿樣品，加入內標替硝唑甲醇溶液和乙酸水溶液，加入甲醇或乙腈進行蛋白沉淀，離心后取上清液；

(2)將步驟(1)預處理后的血漿樣品進行液相色譜分離：色譜條件中色譜柱為安捷倫ZORBAX?SB-C18柱；流動相：體積比為50:50的甲醇與水；流速：0.2-0.5mL·min^-1；柱溫：30-40℃；進樣量10μL；洗脫方式為等度洗脫；

(3)質譜測定，條件為：離子源：電噴霧離子化電離源ESI；離子檢測方式：多反應監測MRM；離子極性：正離子；毛細管電壓：3.0KV；離子源溫度：80-120℃；脫溶劑溫度：340-360℃；脫溶劑氣：400L/h；錐孔電壓：45V；錐孔氣：35L/h；脫溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣；檢測對象的離子通道：球毛殼堿甲，[M-H]+，m/z637.30→549.20，Dwell0.5，Cone45，Collision?Energy35；內標替硝唑，[M-H]+，m/z248.20→121.00，Dwell0.5，Cone30，Collision?Energy15；

(4)計算：采用內標法，以球毛殼堿甲和內標替硝唑的峰面積比值代入標準曲線方程計算球毛殼堿甲的濃度。

2.根據權利要求1所述的測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，步驟(1)中，取血漿樣品50μL，加入內標1000ng·mL^-1替硝唑甲醇溶液10μL和20v/v％乙酸水溶液5μL，加入190μL甲醇或乙腈，振蕩3min，12000rpm離心10min，離心后取上清液。

3.根據權利要求1所述的測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，步驟(2)中，色譜柱長度為150mm，內徑為2.1mm，填料粒徑為5μm。

4.根據權利要求1所述的測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，所述的血漿為給予了含球毛殼堿甲藥物的血漿。

5.根據權利要求1所述的測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，所述血漿為人或動物的血漿。

6.根據權利要求1所述的測定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，所述血漿為大鼠血漿。