[發(fā)明專利]一種海水中敵百蟲手性對映體的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410380141.0
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN105319293A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 聶晶;歐陽小琨;高小峰;楊立業(yè);王陽光;吳偉建;郁迪;徐紅萍
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種海水中敵百蟲手性對映體的檢測方法。

背景技術(shù)

敵百蟲[O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羥基乙基)膦酸酯]屬于手性有機磷殺蟲劑，對魚體內(nèi)外寄生的吸蟲、線蟲、棘頭蟲及危害魚苗、魚卵的枝角類、橈角類幼蟲和水蜈蚣等均具有良好的殺滅作用。敵百蟲具有一個手性碳原子，一對手性對映體，其對映體結(jié)構(gòu)式如圖1.1-1.2所示。敵百蟲水解的后產(chǎn)物能與蟲體的膽堿酯酶相結(jié)合，使蟲體神經(jīng)肌肉功能失常，先興奮，后麻痹，直至死亡，常作為抗寄生蟲藥用于海水養(yǎng)殖中殺滅魚虱等常見魚體寄生蟲以提高漁業(yè)產(chǎn)量。敵百蟲在海水養(yǎng)殖中的推薦劑量為0.1～1mg/L，然而在實際養(yǎng)殖工程中，人們常常施用過量的敵百蟲，從而導致養(yǎng)殖水體中出現(xiàn)敵百蟲藥物殘留。敵百蟲對非目標生物也會產(chǎn)生毒性作用(抑制膽堿酯酶活性)，帶有敵百蟲殘留的廢水排入河流或海中，將直接或間接地危害環(huán)境及人類健康。

目前，針對敵百蟲在土壤、環(huán)境、食品中的殘留檢測研究不少，但是尚沒有針對敵百蟲對映體殘留進行分析檢測，并且在以往的研究中，通常不區(qū)分海水養(yǎng)殖用藥的手性對映體，那么水產(chǎn)品藥物殘留的風險評估所依據(jù)的數(shù)據(jù)則不完全真實。因此開展手性藥物對映體拆分技術(shù)的研究，針對水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的敵百蟲的選擇性殘留行為進行系統(tǒng)研究，將大大推進水產(chǎn)養(yǎng)殖用手性藥物研究的進展和應用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種海水中敵百蟲手性對映體的檢測方法，采用高效液相色譜法手性固定相法檢測海水中敵百蟲對映體的殘留量，可成功實現(xiàn)敵百蟲手性對映體的拆分。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種海水中敵百蟲手性對映體的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

1)取養(yǎng)殖海水90～110mL于燒杯中，加入敵百蟲標準品5mg～10mg，振蕩混勻后加入1～2滴20wt％冰乙酸溶液，取10～50mL過HLB固相萃取小柱，然后用6～10mL乙酸乙酯洗脫，洗脫液收集于容量瓶中；

2)將步驟1)中的洗脫液乙酸乙酯用氮氣吹至近干，殘液用正己烷+異丙醇的流動相溶解定溶至1mL，并采用0.22μm微孔濾膜進行過濾后得到溶液A，它以正己烷與異丙醇體積比為85～95:15～5做為流動相對敵百蟲對映體進行分離；

3)采用高效液相色譜儀對上述溶液A進行檢測；檢測時選用CHIRALCELIC手性柱，手性柱的柱溫為20℃～35℃，正己烷與異丙醇體積比為85～95:15～5做為流動相，檢測時的流速為0.7mL/min～1.0mL/min，波長為207nm。

作為改進，步驟2和3)的流動相還含有乙醇，它以正己烷、異丙醇與乙醇體積比為90:8～9.5:2～0.5做為流動相對敵百蟲對映體和水樣中的雜質(zhì)進行分離。

再改進，所述步驟2和3)的正己烷、異丙醇與乙醇的體積比為90:8.5:1.5。

優(yōu)選，所述步驟3)的檢測時的流速為1.0mL/min。

優(yōu)選，所述步驟3)的柱溫為25℃。

優(yōu)選，所述步驟3)的CHIRALCELIC手性柱的填料為5μm硅膠表面涂布纖維素-三[3,5-二氯苯基氨基甲酸酯]。

最后，所述步驟1)的HLB固相萃取小柱是經(jīng)甲醇+水活化。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：采用高效液相色譜法手性固定相法檢測海水中敵百蟲對映體的殘留量，成功實現(xiàn)了敵百蟲手性對映體的拆分，從而可對海水中敵百蟲對映體的殘留量進行檢測，為海水中手性藥物殘留檢測提供理論依據(jù)。其中，對映體及在0.5mg/L～10mg/L濃度范圍內(nèi)與其響應值呈良好的線性關(guān)系，回歸方程及相關(guān)系數(shù)分別為y＝20.795x–1.7766、R²＝0.9993及y＝19.730x+2.9066、R²＝0.9992，樣品平均回收率分別為89.07％和82.93％，日間精密度分別為6.77％和6.29％，定量限分別為0.05mg/L和0.04mg/L。

附圖說明

圖1.1～1.2是本發(fā)明提供的敵百蟲對映體結(jié)構(gòu)式；

圖2是本發(fā)明實施例中敵百蟲的色譜圖。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。

一種海水中敵百蟲手性對映體的檢測方法，包括以下步驟：