[發明專利]一種水稻種胚RNA的提取方法在審
| 申請號： | 201410379838.6 | 申請日： | 2014-08-05 |
| 公開（公告）號： | CN105316316A | 公開（公告）日： | 2016-02-10 |
| 發明（設計）人： | 張建福;謝華安;魏毅東 | 申請（專利權）人： | 張建福;謝華安;魏毅東 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 350003 福建省福州市五四*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 水稻 rna 提取 方法 | ||
1.一種水稻種胚RNA的提取方法，步驟如下：
(1)將10粒種子剝胚，將胚裝入EP管中，立即加入200ulTripure，用尖頭玻璃棒快速捅碎，加入800ulTripure，迅速快速顛倒振蕩30s以上，室溫靜置10min；
(2)加入200ul的氯仿，顛倒振蕩使兩相充分混合，室溫靜置10min；
(3)4℃12000g離心10min，吸取上清約450ul加入等量冰異丙醇，輕輕顛倒振蕩充分混合，室溫靜置10min；
(4)4℃12000g離心15min，棄上清并加入1ml75％乙醇，輕輕吹打沉淀，使之飄起，4℃12000g離心3min，棄上清；
(5)重復(4)，500ul乙醇即可；
(6)將空管12000g離心2min，吸干余液，放置大約30s，立即加入30-60ulRNase-freewater，輕輕吹打數次，使沉淀溶解，隨后水浴65℃5min使其充分溶解并打開二級結構；
(7)如果RNA不立即使用，步驟6加入乙醇后，放置－20℃保存，待用時，取出4℃離心后棄上清進行步驟6；
(8)溶解的RNA最好立即測定OD，用1xTBE配制1％瓊脂糖電泳220v11min跑電泳，操作必需在冰上進行，RNA可保存在－20℃短期保存或-80℃長期保存，如果RNA重新凍融必須吹打混勻后進行后續實驗。
2.根據權利要去1所述的種胚RNA的提取方法，其特征在于：水稻種胚未浸泡或者浸泡處理均可。
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