[發(fā)明專利]一種高活力酸性蛋白酶

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410379288.8
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN105316308A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發(fā)明（設計）人: 李洪兵;李海清;張錦杰;朱永明;胡永明;劉文明
• 申請（專利權）人: 湖南新鴻鷹生物工程有限公司
• 主分類號: C12N9/62
• 分類號: C12N9/62;C12R1/66
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，其酶學性質(zhì)如下：

(1)溫度：該酶適應反應溫度30-55℃，最適反應溫度40-50℃；

(2)pH：適應pH值范圍2-6，最適pH值2.5-3.5；

(3)酶活性：發(fā)酵液酸性蛋白酶酶活可達13000-14000U/mL；

(4)熱穩(wěn)定性：該酶在70℃條件下保存1h后仍能保持75％以上酶活，65℃條件下保存1h后保持80％以上酶活；

(5)存儲穩(wěn)定性：該酶在室溫下保存12個月后酶活損失小于2.2％。

2.如權利要求1所述的一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，所述高活力酸性蛋白酶的制備方法包括如下步驟：保存完好的宇佐美曲霉CCTCCNO：M2013601的菌種經(jīng)斜面菌種活化、一級、二級、三級液體種子擴大培養(yǎng)至種子罐，將種子罐液體種子以5％接種量接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度31-32℃，攪拌速度200-400r/m，通風量1:1-2,培養(yǎng)時間10-12h；然后以1-2℃/h降溫速率緩慢降溫至26-30℃，攪拌速度400-600r/m，通風量1:1-3,恒溫培養(yǎng)8-10h；繼續(xù)以1-2℃/h降溫速率緩慢降溫至23-25℃，攪拌速度500-700r/m，通風量1:2-4,培養(yǎng)時間22-31h，然后，將種子罐液體種子以3％接種量追加接入發(fā)酵罐，最后以1-2℃/h升溫速率緩慢升溫至31-32℃，攪拌速度200-400r/m，通風量1:1-2,恒溫培養(yǎng)10-12h；接著以1-2℃/h降溫速率緩慢降溫至23-25℃，攪拌速度500-700r/m，通風量1:2-4,恒溫培養(yǎng)22-31h；發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、調(diào)配、精濾、干燥得固體酸性蛋白酶。

3.如權利要求2所述的一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，所述斜面培養(yǎng)基組成為：葡萄糖20g，瓊脂20g，中草藥提取物7g,干酪素4g，磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.8g，蒸餾水l000mL，pH值5.8。

4.如權利要求2所述的一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，所述一級、二級、三級種子培養(yǎng)基組成為：麩皮70g,玉米粉55g，豆餅粉38g，海藻糖12g，魚粉8g，氯化銨11g，氯化鈣8g，干酪素8g，中草藥提取物8g，硫酸鎂3g，磷酸氫二鉀2g，純凈水l000mL，pH值6。

5.如權利要求2所述的一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，所述種子罐培養(yǎng)基組成為：麩皮70g,玉米粉55g，豆餅粉38g，海藻糖12g，中草藥提取物12g，魚粉8g，氯化銨11g，氯化鈣8g，干酪素8g，硫酸鎂3g，磷酸氫二鉀2g，純凈水l000mL，pH值6。

6.如權利要求2所述的一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成為：麩皮70g,玉米粉55g，豆餅粉38g，中草藥提取物25g，海藻糖20g，魚粉8g，氯化銨11g，氯化鈣8g，干酪素4g，硫酸鎂3g，磷酸氫二鉀2g，硝酸鉀2g,硫酸鋅0.2g,純凈水l000mL，pH值6。

7.如權利要求3-6任一所述的一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，所述中草藥提取物的制備方法如下：按重量份數(shù)計，稱取黃芪65份，當歸60份，黨參42份，甘草42份，魚腥草40份，神曲40份，金銀花30份，柴胡12份，黃芩12份；將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80℃保持3h，然后降溫至52℃，加入混合物料總重量8％的混合酶制劑進行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6.2，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為1:1.5，控制溫度至70℃保持4h，過濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度90℃保持2h，然后降溫至25-35℃，過濾，得第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比2.5:1.5合并,濾液真空濃縮后冷凍干燥、粉碎即得中草藥提取物。

8.如權利要求7所述的一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，所述混合酶為葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果膠酶按質(zhì)量比4:3:2:1均勻混合。

9.如權利要求2所述的一種高活力酸性蛋白酶，其特征在于，所述種子罐發(fā)酵液菌體濃度為7.0x10⁸-8.0x10⁸個/ml。

10.如權利要求1所述的一種高活力酸性蛋白酶在食品、皮革軟化及飼料工業(yè)中的應用。