[發明專利]一種通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法

在審

• 申請號: 201410379113.7
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN104140984A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 張建國;潘海峰;謝志鵬;鮑文娜
• 申請（專利權）人: 杭州寶晶生物股份有限公司
• 主分類號: C12P7/46
• 分類號: C12P7/46;C12R1/01
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 陳昱彤

1.一種通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于,包括如下步驟：（1）發酵培養表達順式環氧琥珀酸水解酶的重組細胞；（2）使用曲拉通系列表面活性劑作為通透劑對所述重組細胞進行通透化處理；（3）利用通透化處理過的重組細胞來生產L(+)-酒石酸。

2.根據權利要求1所述的通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：在利用通透化處理過的重組細胞生產L(+)-酒石酸之前，先將該通透化處理過的重組細胞使用κ-卡拉膠固定化。

3.?根據權利要求2所述的通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于，將通透化處理過的重組細胞使用κ-卡拉膠固定化的方法如下：

將通透化處理過的重組細胞懸液加入κ-卡拉膠溶液中混勻，冷卻凝固后用氯化鉀溶液浸泡固定，其中，κ-卡拉膠的終濃度為20-60g/l，通透化處理過的重組細胞的終濃度為10-50g/l。

4.?根據權利要求3所述的通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：所述κ-卡拉膠的終濃度為30-50g/l，通透化處理過的重組細胞的終濃度為20-30g/l。

5.根據權利要求1或2所述的通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于，在所述步驟（2）中，對所述重組細胞進行通透化處理的方法為：將步驟（1）所培養的重組細胞用含有曲拉通系列表面活性劑的生理鹽水懸浮，所述表面活性劑的作用濃度為0.01?-?50?g/L；然后靜置或慢速攪拌懸浮液10?min?-?24?h。

6.?根據權利要求5所述的通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：所述表面活性劑的作用濃度為0.1?-?10?g/L，靜置或慢速攪拌懸浮液30?min?-?5?h。

7.根據權利要求1或2所述的通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：所述表面活性劑為非離子表面活性劑。

8.?根據權利要求7所述的通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于，所述非離子表面活性劑為失水山梨醇脂肪酸酯系列表面活性劑、聚山梨酯系列表面活性劑、聚乙二醇對異辛基苯基醚系列表面活性劑、烷基酚聚氧乙烯醚系列表面活性劑或月桂醇聚氧乙烯醚系列表面活性劑。

9.?根據權利要求8所述的通過改善細胞通透性生產L(+)-酒石酸的方法，其特征在于：所述非離子表面活性劑為曲拉通X-100。