[發明專利]一種MEK激酶抑制劑

在審

• 申請號: 201410377809.6
• 申請日: 2014-08-01
• 公開（公告）號: CN105287509A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 陶建臣
• 申請（專利權）人: 陶建臣
• 主分類號: A61K31/37
• 分類號: A61K31/37;A61P35/00;C07D311/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是屬于一類新結構類型香豆素類化合物，具體地是一種MEK激酶抑制劑。并主要采用Pechmann等反應進行了合成；與陽性藥U0126相比，部分化合物表現出良好的MEK結合活性、對非活化MEK的抑制活性，以及抗A375黑色素瘤細胞和HT-29結腸癌細胞增殖的活性，具有被開發為抗腫瘤藥物。

背景技術

Ras/Raf/MEK/ERK信號通路是絲裂原活化蛋白激酶通路（MAPK）中的一個重要家族，主要參與細胞發育、生長、分化等重要過程，其活性持續上調與腫瘤的發生密切相關。MEK激酶是ERK通路的核心，具有獨特的結構和功能特點，在該通路中起關鍵的承上啟下作用。

參考對比發明專利激酶抑制劑，專利號為201080049613.4，其公開了一組新蛋白激酶抑制劑(吡啶并[4，3-d]嘧啶-5-酮衍生物)及其藥學上可接受的鹽，可用于治療細胞增殖性疾病或障礙性疾病，如癌癥、自身免疫性疾病、感染、心血管疾病和神經退行性疾病和障礙性疾病。本發明提供了用于合成蛋白激酶抑制劑化合物的方法及該化合物的給藥方法。本發明還提供了包含至少一種該蛋白激酶抑制劑化合物以及適用于該化合物的藥學上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑的藥物制劑。本發明還提供了在吡啶并[4，3-d]嘧啶-5-酮衍生物的合成過程所產生的有用中間體。

就目前所知，只有MEK能激活ERK，ERK也是MEK的唯一底物，這一點是非常特別的，預示著MEK抑制劑阻斷ERK通路的作用將是高度特異性的。大部分已報道的MEK抑制劑屬于ATP非競爭性變構抑制劑，其結構大多具有二芳基胺骨架，本文設計并合成了一系列以香豆素為母核的新型ATP非競爭性MEK變構抑制劑，并對它們進行了活性評價，結果顯示這類化合物具有良好的MEK結合活性、MEK抑制活性及抗腫瘤作用。

發明內容

本發明提供了一種MEK激酶抑制劑，一類新結構類型的香豆素類化合物，并主要采用Pechmann等反應進行了合成，同時對不同位點進行了結構衍生和修飾。化合物對MEK激酶的抑制作用主要體現在對非活化MEK磷酸化過程的抑制，而對磷酸化MEK對下游底物ERK磷酸化過程的抑制作用較弱。

本發明采用如下技術方案。

本發明采用香豆素化合物G8935與MEK結合，用對接軟件將其與MEK進行對接，并將結合模式與二芳基胺類抑制劑PD318088，并將結合模式與二芳基胺類抑制劑PD318088進行了比較，發現兩者打分值相似，G8935與PD318088的重疊度非常高，而且C3位芐基占據新疏水口袋，是香豆素類的新結合點。因此我們在此基礎上設計了一系列3位、4位和7位為不同取代基的香豆素衍生物并進行了合成。

在一個方面，本發明采用以烷酰基乙酸乙酯為原料，與溴芐或對氟溴芐在堿性條件下應，制備3-芐基烷酰乙酸乙酯或3-取代芐基烷酰乙酸乙酯，然后與間苯二酚通過Pechmann應制備7-羥基香豆素中間體，最后與酰氯反應得到目標產物。

在一個方面，本發明采用HTRF的方法檢測了化合物與磷酸化MEK1的結合能力。采用384孔板，加入ActiveGST-MEK1，Eu-Anti-GST，Kinasetracer236和不同濃度的待測化合物，采用酶標儀檢測信號并對數據進行處理。所測99個化合物中，共發現25個化合物具有與磷酸化MEK1結合能力，IC50值最低達到54.57nM（M29）。

在另一方面，本發明同樣采用HTRF方法檢測化合物對磷酸化MEK1的抑制作用，加入化合物，inactiveERK2，activeMEK1，ATP，然后加入抗體MAbAnti-phosphop44/42-K和MAbAntiGST-XL665，采用酶標儀檢測信號并對數據進行處理。實驗重復3次。結果顯示化合物對磷酸化MEK1的抑制作用的IC50在10μM左右，因此化合物雖然與磷酸化的MEK1有較強的結合能力，但是并不能在底物ERK存在的環境中，影響到磷酸化MEK對ERK的磷酸化作用。

在另一方面，本發明同樣采用HTRF方法，檢測化合物對非磷酸化MEK1的抑制作用。加入化合物，activeBRAF，inactiveMEK1，ATP，然后加入抗體MAbAnti-phosphoMEK1/2-K和MAbAntiGST-XL665，采用酶標儀檢測信號并對數據進行處理。實驗重復3次。結果顯示M2、M4、M5、M29、M56對非磷酸化MEK1的抑制作用較高，活性接近或高于陽性對照藥U0126。

具體實施方式